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荧光标记胆固醇衍生物定制技术-西安杏彩体育平台 生物
发布时间:2025-07-04     作者:zhn   分享到:


荧光标记胆固醇衍生物定制技术

一、概述

蛋白质是类固醇脂质的更重要是,大范围直接参与菌物膜倡导、脂质装修标准统和类脂体口服药传承中。将蛋白质确定荧光标示(如FITC、Rhodamine、Cy5等),常用于生殖细胞动态化成相、蛋白质新陈代谢定位跟踪、nm膜蛋白情况分析等。


二、定制合成技术流程

1. 胆固醇衍生物设计

通常的可标志胆固醇升高延伸物还包括:低密度胆固醇-羧酸(Chol-COOH)热量-氨基(Chol-NH₂)低密度胆固醇-羟基(Chol-OH)这之中Chol-NH₂ 和 Chol-COOH 是荧光偶联的很好前体。

2. 选择荧光染料及官能团

常常用荧光符号物非常响应基团:FITC(异硫氰酸荧光素) → 反映氨基NHS-Cy5/Cy3 → 酰胺键连结氨基Rhodamine B Isothiocyanate → 与氨基反应迟钝Fluorescein-NHS ester → 与蛋白质-氨基共轭

3. 偶联反应过程

液体:DMSO、DMF、乙腈保护液:碳酸盐保护液(pH 8.0–9.0)高温:室内温度或4°C,遮光混合 12–24 h摩尔比:固醇:荧光基团 = 1:1.2(提醒尽量量过大荧光染色剂)

4. 纯化与表征

TLC或HPLC主要用于出掉未反馈荧光素质谱、NMR、UV-Vis、荧光光谱分析使用设计和特性查证


三、应用示例

蛋白质转运公司示踪进行实验(细胞膜摄入)脂质体中胆固醇升高的行为实验甘油三酯体现奈米粒追综标记


四、常用试剂推荐

各称用处
FITC、NHS-Cy5荧光符号剂
Cholesterol-NH₂、Chol-COOH符号前体
DMSO、碳酸盐缓解液液体系統
Sephadex G25柱脱盐纯化



荧光标记胆固醇衍生物定制技术

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