荧光标记胆固醇衍生物定制技术-西安杏彩体育平台
生物
荧光标记胆固醇衍生物定制技术
一、概述
蛋白质是类固醇脂质的更重要是,大范围直接参与菌物膜倡导、脂质装修标准统和类脂体口服药传承中。将蛋白质确定荧光标示(如FITC、Rhodamine、Cy5等),常用于生殖细胞动态化成相、蛋白质新陈代谢定位跟踪、nm膜蛋白情况分析等。二、定制合成技术流程
1. 胆固醇衍生物设计
通常的可标志胆固醇升高延伸物还包括:低密度胆固醇-羧酸(Chol-COOH)热量-氨基(Chol-NH₂)低密度胆固醇-羟基(Chol-OH)这之中Chol-NH₂ 和 Chol-COOH 是荧光偶联的很好前体。2. 选择荧光染料及官能团
常常用荧光符号物非常响应基团:FITC(异硫氰酸荧光素) → 反映氨基NHS-Cy5/Cy3 → 酰胺键连结氨基Rhodamine B Isothiocyanate → 与氨基反应迟钝Fluorescein-NHS ester → 与蛋白质-氨基共轭3. 偶联反应过程
液体:DMSO、DMF、乙腈保护液:碳酸盐保护液(pH 8.0–9.0)高温:室内温度或4°C,遮光混合 12–24 h摩尔比:固醇:荧光基团 = 1:1.2(提醒尽量量过大荧光染色剂)4. 纯化与表征
TLC或HPLC主要用于出掉未反馈荧光素质谱、NMR、UV-Vis、荧光光谱分析使用设计和特性查证三、应用示例
蛋白质转运公司示踪进行实验(细胞膜摄入)脂质体中胆固醇升高的行为实验甘油三酯体现奈米粒追综标记四、常用试剂推荐
各称 | 用处 |
FITC、NHS-Cy5 | 荧光符号剂 |
Cholesterol-NH₂、Chol-COOH | 符号前体 |
DMSO、碳酸盐缓解液 | 液体系統 |
Sephadex G25柱 | 脱盐纯化 |
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