产品名称:FITC-Lysozyme
溶解度:95%+物理性质:无水硫酸铜或液滴贮存必备条件:-20°C干躁背光保持封装品种:50mg 100mg 250mg 500mg(按需给出)公司:杏彩体育平台 生物体化学偶联机制与反应活性
考虑到溶菌酶原子核较小且赖氨酸數量有效,FITC 偶联密度计算公式可明确设定,所以在保障荧光走势的情况下,要使用蛋清漆层的效果位点和活力性中间。
FITC 的化学反应活性来源于其异硫氰酸基(–N=C=S),这一活性基团对亲核试剂,尤其是蛋白质的伯胺(如赖氨酸ε-氨基或N端氨基)具有高度选择性。在偶联过程中:- 溶菌酶的赖氨酸残基或N端伯胺亲核功击 FITC 异硫氰酸碳原子核。
- 组成安稳的氨基异硫氰酸酯键(thiourea)。
- 响应温顺(基本上在轻是碱性的减慢液,pH 8–9,常温),规避球营养物质构象毁掉,并且保持良好 FITC 的荧光使用性能。
溶菌酶底物结合位点与反应活性
溶菌酶活性中心主要位于其折叠的活性口袋,由谷氨酸、天冬氨酸等残基构成,负责催化多糖底物(如聚-N-乙酰葡萄糖胺)的糖苷键水解。FITC 偶联主要定位于表面赖氨酸残基,远离活性中心,因此对催化活性影响较小。适当控制偶联摩尔比和反应条件,可获得具有荧光信号且保留部分底物水解能力的 FITC-Lysozyme。荧光标记与反应性平衡
荧光强度与偶联密度:偶联密度过低,荧光信号不足;过高,可能引起蛋白质局部构象变化或活性位点阻碍。因此需通过调节 FITC/Lyz 摩尔比(常用 1:1 至 5:1)和反应时间(2–12 小时)平衡荧光性能与活性。
空间间隔:在部分体系中,可使用柔性短链(如 6-氨己酸 Ahx)连接 FITC 与蛋白,增强荧光团与蛋白活性中心的空间隔离,减少对底物结合的干扰。
溶解性与反应条件优化
FITC-Lysozyme 保持良好水溶性,可在中性或弱碱性缓冲液中稳定存在。偶联过程中,需避免高温、极端pH或高盐环境,以防蛋白折叠改变或聚集。通过适当缓冲体系(如碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液),反应活性可得到充分发挥,荧光标记与蛋白功能兼顾。生物实验与功能应用
FITC-Lysozyme 的反应活性特性赋予其在实验和应用中的多种用途:分子示踪:通过荧光信号追踪溶菌酶在细胞或组织中的摄取与分布。
底物水解实验:部分保留的催化活性可用于荧光底物反应实验,分析酶动力学。
复合体系构建:FITC-Lyz 可作为荧光标记模块,用于纳米载体、药物递送体系或蛋白-多糖复合物的构建,观察蛋白与靶分子相互作用。
细胞摄取与结合分析:荧光标记溶菌酶可用于研究胞内摄取路径、膜结合特性及局部环境对蛋白活性的影响。
稳定性与储存
至于公司
FITC-Lysozyme 在缓冲液中保持荧光稳定性和蛋白构象完整性,避免长时间光照和极端温度。偶联稳定性良好,可在实验周期内保持反应活性,为荧光示踪和酶学实验提供可靠工具。