FITC-Dextran 是通过异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate, FITC）与葡聚糖（Dextran, 右旋糖酐）偶联形成的荧光标记多糖。所用Dextran 分子量为40 kDa，属于中高分子量多糖，具良好的水溶性、化学稳定性和生物相容性。Dextran 由 α-D-葡萄糖残基通过α-(1→6)主链连接，并带有少量α-(1→3)支链，分子中含有大量羟基和还原性末端，为化学改性提供反应位点。FITC-Dextran 结合了葡聚糖的水溶性和FITC的荧光功能，可用于荧光标记、细胞追踪、分子扩散研究以及药物递送体系的示踪分析。
40 kDa 的Dextran具有着优惠的碳原子量，在保持稳定饱和溶液流动性和参透性的同样作为够了的碳原子链总长，于调节管控荧光标签碳原子的范围地理分布和多耐热性化耐热性。FITC-Dextran 的炼制行车路线核心以及下述方法流程：Dextran 的氨基化衍生
原始Dextran 分子表面含有羟基，无法直接与FITC反应。首先通过氨基化方法将部分羟基转化为伯胺或仲胺功能团，为FITC偶联提供亲核位点。典型方法为利用氨水或乙二胺在温和条件下与Dextran 进行还原胺化反应，可选择性在还原末端或支链羟基上引入氨基。反应在中性至弱碱性条件下进行，温度通常控制在室温至轻微加热（25–50℃），避免多糖降解。氨基化程度可通过调节氨基试剂摩尔比和反应时间控制，以确保FITC偶联的均匀性和荧光信号稳定。FITC 偶联反应
将FITC 溶解于无水乙醇或DMSO 中，并缓慢加入到氨基化Dextran 溶液中，反应体系为弱碱性缓冲液（如碳酸氢钠缓冲液，pH 8.0–9.0）。FITC 的异硫氰酸基（–N=C=S）与Dextran 上的胺官能团发生亲核加成，形成稳定的氨基异硫氰酸酯（thiourea）键。反应通常在室温避光条件下进行数小时至一夜，以保证高偶联效率和荧光团稳定性。FITC与Dextran 的摩尔比可根据目标标记度进行调整，高比例FITC可增强荧光信号，而低比例可避免分子间猝灭和聚集。纯化与分离
偶联反应完成后，需要去除未反应的FITC及小分子副产物。纯化方法主要包括透析、凝胶过滤或超滤。透析一般采用适当分子量截断（MWCO ~10 kDa）膜，将FITC-Dextran 保留在膜内，同时将游离FITC排出。凝胶过滤（如Sephadex G-25 或 Sephadex G-50）可进一步分离标记产物，保证分子均一性和荧光性能。纯化后的FITC-Dextran 溶液通常呈均匀透明水溶液，便于储存和实验使用。标记度与浓度测定
FITC-Dextran 纯化后可通过紫外-可见光谱或荧光光谱测定荧光团浓度，同时测定Dextran浓度，计算标记度（Degree of Substitution, DS）。标记度调控对荧光强度、溶液黏度和分子稳定性有重要影响。通过合理控制标记度，可获得高信号且保持分子水溶性和化学稳定性的产物。储存与使用条件
FITC-Dextran 溶液一般储存于4℃避光环境中，以保持荧光强度和分子稳定性。冻干固态形式可长期保存，使用前溶解于缓冲液。分子量为40 kDa 的FITC-Dextran 具有适中扩散速度和溶液黏度，适用于细胞摄取实验、血管通透性研究及药物递送追踪实验。
杏彩体育平台
微信公众号
官方微信