Biotin-SS-Tyramide 生物素-二硫键-酪胺的作用机制
Biotin-SS-Tyramide(生物素-二硫键-酪胺)是一种常用的生物素化试剂,它结合了 生物素(Biotin)标记、二硫键(–SS–)可裂解连接子以及酪胺(Tyramide)活性基团,在分子标记和信号放大实验中具有重要作用。这类分子通常应用于 酪胺信号放大(Tyramide Signal Amplification, TSA)体系,同时由于引入了 二硫键连接子,在实验后还能够通过还原剂切断,从而释放生物素,实现灵活的可逆标记与下游分析。
设计构成与工作结构特征Biotin 这部分生态学素是一个种亲和素(Avidin)或链霉亲和素(Streptavidin)的高亲和性配体,搭配常数可能达到 10^-15 M,可能说是不能可逆性的。哪一优点使 Biotin 变成 常见的原子核标记中之一,可能进行灵活的探测和高效益的采集。在 Biotin-SS-Tyramide 中,生物学素大部分是最终能够的论文检测与生物富集标示。SS(二硫键)接子二硫键是一个种 可裂解的化学式键,在温文尔雅的展现状态下(如 DTT、TCEP、谷胱甘肽等)可被碎裂。该构思导致生物工程技术素标价签还具有可逆反应性,研究研究师能够在是需要时消除或尽情释放生物工程技术素标价签,这在蛋白酶质组学、原子核抓取与前因后果质谱研究中越发根本。Tyramide 部件Tyramide 有的是种还可以在过钝化物酶(如 HRP, 辣根过钝化物酶)离子液体下被钝化的大分子。在 HRP 和 H2O2 出现下,tyramide 会和转化了为极度生物的恣意基,此类恣意基就能够与淀粉酶质中的酪氨酸残基(–OH 基团)共价融合,最终得以将 Biotin 标鉴锚定到目的淀粉酶质或组织性中。种移动信号调小具体方法可以验测灵活度延长十余倍因此上千倍。用处机理Biotin-SS-Tyramide 的标出流程基本上包涵低于一些步凑:靶安全标判断:理论研究专业人员一般而言将 HRP 偶联到一抗或二抗,适用于特异形判断计划大分子。酪胺反馈:在 H2O2 具有下,HRP 催化反应 Biotin-SS-Tyramide 的酪胺基团被转化为放任基。共价融入:这个随心所欲基与附近血清质或组建中的酪氨酸残基发生了偶联反响,而在靶标有的堆积过多 Biotin 标记。数据网络信号放小:累积的 Biotin 可根据起来荧光标识的链霉亲和素,或与酶偶联的链霉亲和素根据起来,关键在于放小验测数据网络信号。可逆转施放:如果你是需要进第一步分折,应该凭借备份剂断开二硫键,施放已记号的 Biotin 分子结构或使组合稳定。