DIG Styramide,DIG酪胺的反应原理与应用机制
DIG Styramide,又称 DIG 酪胺,是一种常用于化学标记和分子检测的试剂。其全称通常为 Digoxigenin-tyramide,它是将小分子类甾体糖苷化合物 digoxigenin(DIG)通过酪胺(tyramide)连接形成的衍生物。
物理化学形式与规定性DIG Styramide 由二个重点要素造成:DIG 基团和酪胺基团。DIG 不是种品种甾体单质,拥有较高的维持性和特异形,是行按照抗 DIG 表面抗原保持选泽性辨识。酪胺基团不是种种含酚羟基的香味胺设计,是行在过硫化物酶(如辣根过硫化物酶,HRP)促使剂的作用发放生随心所欲基生理想法,故而与周边的香味单质共价结合在一起。该设计使 DIG Styramide 提供“走势调小”的优点,即极少量标识氧分子是行在促使剂的作用生理想法中提取非常多磨合物,提升 判断走势的精确度度。反应迟钝目的与应用原则DIG Styramide 的内在APP依懒于 HRP 促使的酪胺4g无线警报图像放大(Tyramide Signal Amplification, TSA)技艺。在该标准中,DIG Styramide 被 HRP 促使转换成抗逆性只有基,某些只有基可高效与对象原子周围的香味基团共价紧密联系。鉴于这紧密联系是局布的且存在的高度特情人,因而可强势不断促进标识原子的4g无线警报挠度,同一时间始终保持余地签别率。相信传统艺术的直接性标识步骤,TSA 技艺可以使荧光或黑色素4g无线警报不断促进二十余倍竟然100左右倍,故而不断提高低丰度对象的可检则性。运行需要注意问题溶剂标定:DIG Styramide 基本需要符合调查实用前融化于应当的缓冲区区液中,如 PBS 或 Tris 缓冲区区液,溶剂应背光保存图片,以避免被氧化溶解。生理反應能力:酪胺生理反應须得 HRP 催化剂的作用,并一般在温暖能力下采取(常温至 37°C),生理反應时光太短有可能促使非特异形沉积状。保存图片与比较稳定量分析:固态 DIG Styramide 应放置于恒温(-20°C)干燥的氛围中;氢氧化钠溶液应远期限运行完成,并规避长期限光线。