DMPE-CY5，CY5标记二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的反应条件
DMPE-CY5，CY5记号二肉豆蔻年华酰磷脂酰胆碱的不起作用條件
DMPE–Cy5 为将 Cyanine5（Cy5）荧光团共价连接到磷脂 PE 头基的脂类荧光探针，保留两条 C14（肉豆蔻）疏水链用于嵌入脂质双层，而 Cy5 提供强的近红外/深红色发射（激发约 ~650 nm，发射约 ~670 nm），适用于脂质体/外泌体/细胞膜示踪、多通道成像与 FRET 实验。共价键合使染料不易从膜上脱落，利于长时间成像与定量示踪。
获得步聚简析（关键、按步聚）普通机械制剂提前准备：选用或制法 DMPE（1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine）（即为盐型如 HCl 模式前须中合）与 Cy5-NHS（Cy5-succinimidyl ester）。非常空气干燥无水溶液：DMF 或 DMSO（普通机械反响溶液），氯仿/甲醇代替溶解度与浸取。非常空气干燥剂与惰性气休（N₂）紧急。酸碱度普通机械制剂常见 DIPEA 或三乙胺（TEA）作抓取导出的酸并有助于酰胺化。水解与脱水等：将 DMPE 用氯仿/甲醇（9:1）水解后旋转视频汽化成聚酰亚胺膜，再置入真空箱粗糙以出掉痕量的水分；或单独在无水 DMF 中水解（优先级无水水平）。Cy5-NHS 在几瓶无水 DMF 中组成产出液（闭光）。反馈配量：按磨尔比 DMPE : Cy5-NHS = 1 : 1.1–1.5（少少中毒的 NHS 酯有助驱动包反馈），填加 DIPEA（约 2–5 等当量）以提高咸性。全都在惰性课堂气氛下操作使用并背光。不良反應先决条件：高温震荡攪拌 4–16 分钟（视浓硫酸浓度与水解性，可在 0–25 °C 缓解）。若水解度情况，该用极少量 CHCl₃/DMF 共溶后不良反應。用 TLC（硅胶材料，CHCl₃/MeOH/H₂O 少量系数）或 analytical HPLC 监控器耗电量与货物建成（脂类-纺织染料移迁基本特征与起止物不一样）。反映撤销与粗破乳：反映后引入水或减慢氢氧化钠溶液淬灭大量 NHS 酯，确定液-液精炼（有机酸肥料相 CHCl₃），洗去水溶解性残渣（稳定度 NHS、二价盐等）。有机酸肥料相用无水 Na₂SO₄ 变干，滤水并精炼。纯化：脂类-颜料一般性用二种的方式纯化：矽胶柱层析（使用洗刷风险管理体系 CHCl₃→CHCl₃/MeOH→CHCl₃/MeOH/H₂O，小心留意使用性磷酸酯要素）；反相 preparative HPLC（更经常用、回笼率好）：乙腈/水 等度（可含 0.1% 甲酸或三氟乙酸的调节峰形）对溶合 Cy5 含脂类物品与未响应脂类、徘徊活性染料为更有效。会目的性收藏都具有 Cy5 吸收率（~650 nm）的分馏峰。干躁与存储：纯品用转动汽化温度过低浓缩咖啡后速冻干躁或用氦气吹一吹并溶水小量无水酒精或 CHCl₃/MeOH，全自动灌装机阴凉、在 −20 °C（或 −80 °C 继续）维持，避免出现对此冻融。研究方法原则（适用于核对结构设计与色度）• UV-Vis/荧光：明确 Cy5 功能吸纳峰（~640–650 nm）与散发（~660–680 nm），核对摩尔吸光数值。• 质谱（ESI-MS 或 MALDI-TOF）：手机验证共价相连接后大分子量指标（造成 [M]+ 或 [M+Na]+ 峰）。• HPLC 研究分析：反相 HPLC 决定含量（目标值 > 95%）。• ¹H NMR / ³¹P NMR：脂类 NMR 能给出头基与甘油骨架数据（提前准备大氧分子与疏水链使峰形展宽），³¹P 可认可磷酸骨架完善性。• TLC/磷脂定性分析（如 磷水平测定方法 或 薄层色谱显色法）能作条块结合证。• 功能表手机验证：将 DMPE–Cy5 下载脂质体或神经细胞3d模型中，检查荧光嵌到手段、光安稳性及变迁/分布图（荧光显微或光谱图学检测）。注重情况说明与使用攻略• 若对象为 DMPC–Cy5（PC 头基），因无游离子胺，首先需要用功能化 PC（如含胺具象化 PC、或获取 PEG-NH₂ 链）或利用单击化学物质（azide/alkyne）将二次呈现的脂质与 Cy5-性子偶联。• 调控含水率与背光对高产出率与防止 Cy5 淀粉水解/光降解为重中之重。• 染剂-脂类的集聚态可不良影响转移与分析方法，反相 HPLC 与质谱一般说来能信。产品名称：DMPE-CY5，CY5记号二肉豆蔻年华酰磷脂酰胆碱
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