CY7.5-Angiopep-2，远红外荧光肽探针的合成步骤
CY7.5-Angiopep-2，远红外荧光肽电极的生成工作步骤
CY7.5-Angiopep-2 是将Angiopep-2（序列：TFFYGGSRGKRNNFKTEEY，19 aa）与近红外染料 Cy7.5 共轭得到的远红外荧光肽探针。Angiopep-2 来源于 Kunitz 域，能与低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（LRP-1）结合，通过受体介导的跨胞吞作用帮助分子穿越血脑屏障（BBB），常被用作将药物或示踪团递送至中枢神经系统的配体。
Tocris BiosciencePMCCy7.5 放出处在近红外区，可在安排组织荧光低游戏 背景下给予高准确度走势。将纺织纺织纺织染料凭借多种物理化学式措施（NHS 酯与肽的 N 端或 Lys；maleimide 与 Cys；弹框物理化学式凭借 azide/alkyne）与 Angiopep-2 共轭，必得到多种联接形式的生成物以实现生物制品学特点与构象动态平衡性的必须。为着少纺织纺织纺织染料对肽肾上腺素受体相结合或跨膜运输亲水性的干涉，常添加软性时间间隔（β-Ala、PEGn、AEEA）并操控纺织纺织纺织染料与肽的标出度（DOL ≈ 0.8–1.0）。定量分析所采用 RP-HPLC（C18，等度），ESI-MS / MALDI-TOF 确认分子结构量，UV-Vis/荧光谱仪核查纺织染料代谢与试射峰并计算的 DOL；必备时用 DLS / SEC 检查测量聚在一起态。半成品以冻干粉或含极少量防腐施工/比较稳定剂的保护液存放，背光、-20 ℃ 长期性的存放。分解成环节（约460字）设置与保护措施英文方法：选定共轭位点（常用：N-terminal α-amine、侧链 Lys、或在 C-terminus/N-terminus 在加上 Cys）。若要 Lys 位点选择标出，可在固相合出时便用 Lys(Mtt/ivDde) 做正交保护措施英文；若要巯基偶联则在字段尾端或接连导入 Cys(Trt)。为缩减有机染料扰动，提醒在标出位点与系统域直接导入 6-12 氧分子长的 PEG（列举 AEEA 或 PEG3/PEG6）或 β-Ala。固相肽人工（SPPS）：在 Rink amide 或 Wang 硅橡胶上运用 Fmoc 催化自 C 端向 N 端人工 Angiopep-2。每一项步用 HBTU/HATU + DIEA 或 DIC/Oxyma 偶联；对难藕合位点需加倍偶联或延长用时作用用时。侧链爱护根据传统（Asn/Arg/ Lys/等分别用某些爱护基团）。已完成人工后若适用正交爱护（列如 Lys(ivDde)）需要在尽可能方式去掉该爱护以做硫酸铜溶液相标签。裂解与粗分离纯化：用 TFA/水/三异丙基硅烷（95:2.5:2.5）或等效裂解液裂解并去侧链保养，冷乙醚积累粗肽。粗品可凭借 C18 固相提取剔除大一部分释放性/低性沉渣。颜料碱化物备考与偶联：经常用到方案：NHS 酯法：若箭头 N 端或 Lys，水解肽于碳酸氢盐缓冲器（pH 8.0–8.5）或微量分析生产容剂混合法液（DMSO），将 Cy7.5-NHS（1.1–1.5 当量）参加，在常温阴凉反响 30–120 7分钟。为调控肽众多可参加 5–10% HFIP、0.01–0.05% Tween-20 或低酸度磷酸二氢钾。Maleimide 法：若肽含 Cys，先用 TCEP 重置（1–5 mM，pH 6.5–7.0），再与 Cy7.5-maleimide（1.1–1.2 当量）在温度下不起作用 15–60 1分钟，防范典型的含碱具体条件提防止 maleimide 水解反馈或胺侧不起作用。点击率化学物质：若用到 azide/alkyne 特点团，先在固相或溶剂相安装对应手柄，继续使用 CuAAC 或 SPAAC（无铜）先决条件与 Cy7.5-alk/azide 衔接（小心铜或者危害荧光/核脂肪酸，必不可少时用复原剂与螯合剂调整）。纯化：化学反应后用 RP-HPLC（C18，系数 5→60% ACN w/0.1% TFA，流动速度与柱型视规模性而定）破乳单记号副产物。获得相当于峰，冻干能够 TFA 盐形势纯肽。定量分析：用 ESI-MS 或 MALDI-TOF 安全验证原子量；用 UV-Vis（设定颜料代谢峰并换算 DOL）与荧光光谱图检测的发射成功特征；RP-HPLC 于纯净度测评（≥95% 优先）；如需测评技能性，可做离体体细胞联系/内吞实验性室或 LRP-1 争夺联系实验性室产品名称：CY7.5-Angiopep-2
纯净度：95%+物理性质：固体颗粒或固体存储先决条件：-20°C空气干燥背光包存包装设计的规格：50mg 100mg 250mg 500mg（按需能提供）制造厂家：杏彩体育平台 动物
杏彩体育平台
微信公众号
官方微信