Cyanine5-PEG-Hemoglobin，CY5-聚乙二醇-甲状腺球蛋白的合成流程概述
Cyanine5-PEG-Hemoglobin，CY5-聚乙二醇-甲状腺球核蛋白的自动合成注意事项详述
CY5-PEG-Hemoglobin 为将近红外荧光团 Cy5 通过聚乙二醇（PEG）作为柔性连桥共价偶联至血红蛋白（Hb）表面的功能化产物，目标是在保留血红蛋白四聚体构象与氧结合功能的同时赋予可追踪荧光信号。其总体结构可表述为：Hb（四聚体蛋白核心）—（蛋白表面赖氨酸/半胱氨酸残基）—接合位点—PEG（可控链长）—Cy5（荧光末端）。PEG 常选线性 PEG（分子量 500–5000 Da）以调节亲水性与空间位阻，末端一侧带与蛋白反应的活性基团（NHS 酯用于胺；maleimide 用于巯基），另一端为已活化或已接入的 Cy5（如 Cy5-NHS、Cy5-maleimide 或 Cy5-DBCO）。
主要构造合并步骤评述：生化免疫试剂与图片链接臂定制：选着 PEG 厚度并备制或添置 Cy5-PEG-X（X = NHS 或 maleimide）；若遇做园生化免疫试剂，可先合出 PEG-NH2，接下来与 Cy5-NHS 偶联制取 Cy5-PEG-NH2，再将另一类端滋养为 NHS 或 maleimide。核蛋白酶预解决：从商业地产 Hb 或血浆提现物纯化后用减慢（PBS pH7.2，快速清理胺类减慢如 Tris）透析或凝露油烟净化器，测量核蛋白酶溶液浓度并评价指标构象（UV280、CD）与基本功能基线（氧解离曲线图或亚硝酸铵保存的敏感状态）。偶联影响：若用 NHS-产甲烷风险管理体系，在 pH 7.2–7.8 下将 Cy5-PEG-NHS 按目的颜料/核蛋白摩尔比（常 1–5:1 或高，视所必需标签图片度 DOL）注入 Hb 饱和溶液，超高温背光影响 30 min–2 h；若对於半胱氨酸，先将可以使用巯基轻中度保存（TCEP 少量），再于 pH 6.5–7.0 下要 maleimide-PEG-Cy5 参与偶联。操纵影响当量与日子以逃避致使过度标签图片致使构象/基本功能减弱。解除与纯化：用甘氨酸或 Tris 解除游走 NHS 酯不良反应；用于反渗透膜（Amicon，MWCO ~30 kDa）或凝胶的作用过滤器（Sephadex G-25/G-50 或 Superdex 200）清掉游走 Cy5-PEG 与小分子结构副乙酰乙酸，并在合理响应中精炼。研究方法与水平估评：旋光度的测得标上度（DOL）—根据溶解光谱图图（λmax Cy5 ~650 nm 与淀粉酶 280 nm）来计算；SDS-PAGE（荧光复印机扫描 + 染色剂）考验共价运用与聚合；SEC / DLS 估评聚合或四聚体相对稳相关性；若了解水平，旋光度的测得 Hb 的氧运用的身材曲线或过空气非金属氧化物完美重现水平，比效标上前后左右活性氧开展率。MS（若能够）和 CD 光谱图图能用的 于进1步印证体现与特殊结构特征系统性。保护与运用建议大家：高温闭光、含剂或乳糖/甘油的保持稳定缓冲区短期计划 4°C 长久的 -20°C 冻存，记录表 DOL 与浓度值是为了动物学app时更准扑灭。特别注意法定程序与优化系统点：选择短链 PEG 可减低对灵活性位点的手机屏蔽，但可以性加入非特异吸附性；长链 PEG 极为有助于的提升溶解完性与减低免疫力判断但可以性反应四聚体间互为效用。必需以低记号度（DOL 1–2）着手，测试功能表抹去后再按需的提升。全部合并方式应分钟阴凉、地温并一定在的还原游离于胺/巯基扰乱的储存风险管理体系中通过，以提高 Cy5 光学薄膜性与 Hb 构象稳定性。产品名称：Cyanine5-PEG-Hemoglobin，CY5-聚乙二醇-甲状腺球核蛋白
纯净度：95%+物理性质：物质或夜体存为生活条件：-20°C干澡背光存为产品包装样式：50mg 100mg 250mg 500mg（按需具备）厂：杏彩体育平台 生物制品
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