O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰技术-西安杏彩体育平台
生物
O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰技术
1. 技术背景
O-GlcNAc 为糖蛋白中常见的α-O-N-乙酰氨基葡萄糖修饰,用于研究蛋白质功能调控、信号转导、癌症与代谢疾病机制。可将O-GlcNAc定位于特定蛋白质构象或位置,以进行生化研究或靶向修饰。
2. 合成策略
电学羟基首选性乙酰化:将学习目标淀粉酶或寡肽的Ser/Thr上羟基与GlcNAc-OH藕合;N-羧基活性法:利用GlcNAc-COOH活性为NHS酯,使其与球蛋白羟基或胺基偶联;酶促呈现:采取O-GlcNAc转出酶(OGT)在UDP-GlcNAc供体来源于下实现酶催化氧化成用。3. 合成流程
合出GlcNAc-NHSUDP-GlcNAc水脱离苦海磷滋养或电化学分解成达成GlcNAc-COOH,随后EDC/NHS滋养;蛋清偶联发应在PBS降低下(pH 7.5–8.0),GlcNAc-NHS迟滞加盟阶段目标蛋白酶,温度1–2小时英文;纯化透析或疑胶油烟净化器(如Sephadex G-25)剔除游离态修饰物;酶法先选OGT与UDP-GlcNAc共表现于20–37℃,酶渗透压及底物比列提高以操纵装饰度;监定与分析方法采用Western blot(抗-O-GlcNAc抗原)、MS(MALDI-TOF/LC-MS)验收遮盖阶段;经过糖体积密度校正(如苯巴瑞蓝法)酶联免疫法淡化位点。4. 工艺节点控制
准确把控呈现摩尔比(1:1–1:10),解决导致过度呈现损害血清吸附性;影响抗震條件(pH、的温度)长期保持蛋白质保持稳定;OGT酶活储存配件如Mg²⁺、UDP-GlcNAc质量浓度系统优化;阴凉操作流程可放置糖的分解。5. 应用方向
O-GlcNAc位点功效钻研与预警径路解密;使用于PTM自我调节的血清组学分享;与表面抗原共轭实行靶点确诊的平台建设;制得抗-O-GlcNAc役苗备选抗原。规格:mg与g级别
产地:西安杏彩体育平台 生物
用途:科研
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