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  知道态神经细胞备制： 1.滋养枯草芽孢杆菌。-80 ℃保存文档的枯草芽孢杆菌在YPDA陪养基小米平板电脑上划线，30 ℃陪养2-5天。 2.挑取鲜酵母单菌落在YPDA塑造微生物致力于基扁平上划3-5 mm的短期，30 ℃塑造致力于2-六天。 3.待鲜酵母菌单菌落长至的直径2 mm时，把鲜酵母菌体细胞疫苗接种到3 mL YPDA液状体教育培养出基中，30 ℃隔夜教育培养出。 4.**天接转到包含有30-50 mL YPDA液状体养育基的四角瓶中仍在养育，待OD600可达到0.4-0.5，3000 rpm离心式5 min，弃上清。 5.沉淀出的用30-50 mL的无菌检测的去铝离子水悬停。3000 rpm抽滤5 min，弃上清。 6.奠定用1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL无菌室水）重悬后转换至1.5 mL离心力分离管内，3000 rpm离心力分离5 min，弃上清。 还要注意：10 × LiAc Solution所经pH响应，不用再填加TE身为响应剂。 7.假如1 mL 1 × LiAc重悬，小体积计算被有效的转化按每管100 μL灌装，用到文库被有效的转化不灌装。 8.3000 rpm离心法5 min，弃上清，感想怎么写态体细胞即制取之后。 要注意：制得好的感想怎么写态**随时采用，在第8步离心力前，环境温度保存允许可超过5时间。 转换预混液调配：

  酵母粉质粒流量转化： 1.将360 μL预混液下载1支大量态上皮细胞膜中，重复多次吹吸发展，使酵母菌上皮细胞膜彻底清除悬浮按钮于预混液中。 2.30 ℃的水浴锅中孵育30 min，每10 min混匀多次。 3.（融入20 μL DMSO，供选择）42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀多次。 4.12000 rpm抽滤15 s，弃上清液。 5.（可选装流程）用1 mL YPD Plus Liquid Medium再次悬停，30℃摇床振荡提升30-60 min。12000 rpm离心式15 s，弃上清液。 6.进入0.1-1 mL无菌检测去亚铁离子水或0.9%氯化钠液体重悬沉垫，涂挑选激发基板材，30 ℃激发2-3天。 酒曲文库生成：（需要用15-50 mL抽滤管） 1. 将2520 μL预混液融入到心得态神经元（未全自动灌装机）悠长岁月中中，谐振使心得态神经元做好重悬。 2. 安装在30 ℃的水浴锅中孵育50 min，每10 min混匀一次性。 3.（成为160 μL DMSO，可选装）放上在42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀单次。 4. 3000 rpm离心分离5 min，弃上清液。 5.（可选择方法步骤）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬析出，30 ℃摇床阻尼振荡塑造培养90 min，3000 rpm抽滤5min，弃上清液。 6.加盟15 mL无茵去铁离子水或0.9% 氯化钠氢氧化钠溶液重悬菌体，涂挑选陪养基扁平（50个扁平两边），30 ℃陪养2-六天。 要留意作用： 1.转变过程需没有细菌进行操作。 2.第二次选用Carrier DNA，请把装用Carrier DNA的管在滚水中加热5 min，但是之后放置于雪上，用后-20℃吸收预备。下回选用前在雪上化冻Carrier DNA。复发冻融3-5次后需再次变形Carrier DNA。 3.PEG稀硫酸在低溫周围大环境时会挥发，请于常温的周围大环境下齐全溶解性后施用。 4. 据质粒浓硫酸有机废气浓度增减体积计算，加入酵母粉质粒的纯净度和浓硫酸有机废气浓度可以改善转成质量。