SMCC交连剂偶联质粒载体淀粉酶KLH和多肽历程
蛋白质含量质交连剂也是类小大分子化学物质，具备有2个某些更加多的针对性专项 基团（-NH2、-COOH、-HS等）的反应迟钝性末段，行和2个甚至多的氧分子结构分別偶联，因此使等等氧分子结构依照在一个，并且出现共轭淀粉酶。
类产各称称：SMCC
简单：SMCC crosslinker (Succinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) is a heterobi-functional protein crosslinker with a maleimide group that is sulfhydryl (thiol; -SH) reactive and a NHS ester group that is amine reactive. The SMCC crosslinking reagent is permeable across the lipid bilayer of the cell membrane. The 9 atom spacer arm of SMCC is not cleavable.
Molecular Weight: 334.3
CAS #: 64987-85-5
Spacer Length: 8.3 Å
Alternative Names: 4-(N-Maleimidomethyl)cyclohexanecarboxylic acid N-hydroxysuccinimide ester;
企业产商品编码称：Sulfo-SMCC
Sulfo-SMCC crosslinker (Sulfosuccinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) is a water soluble, heterobifunctional crosslinker. Sulfo-SMCC crosslinking reagent has an 8.3 angstrom non-cleavable spacer arm and its maleimide group reacts with sulfhydryls (thiols), while the Sulfo-NHS ester is reactive toward primary amines. Sulfo-SMCC can be used to pro-duce antibody-protein crosslinked conjugates or efficiently label cell surface proteins.
Molecular Weight: 436.4
CAS #: 92921-24-9
Spacer Length: 8.3 Å
SMCC是一种类带有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯和马来酰亚胺的双功能偶联剂.可以将分别含有巯基和氨基的化合物键接在一起。该交联试剂可渗透到细胞膜的脂质双层中，NHS催化活力酯与伯胺在PH7-9的周围自然环境演变成酰胺键。马来酰胺与巯基在PH6.5-7.5的周围自然环境下演变成可靠的硫醚键。在水稀硫酸中，NHS催化活力酯的溶解是（与氨基的现象）个竟争现象。马来酰胺比NHS可靠，但在PH少于7.5时，马来酰胺会逐渐溶解，失却与巯基现象的特异形。而使，在适用SMCC时常是在PH7.2-7.5的周围自然环境下开展，并先让NHS进行现象。
SMCC节构里的环己烷环还能否下降马来酰胺的溶解浓度。这这让淀粉酶质会用SMCC体现后来还能否冻干保存某段准确时间。多淀粉酶质都运用该采血管来做马来酰亚胺体现。
KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)，即血蓝血清，是在这些软体猎物、节肢猎物(蛛蛛和甲壳虫)的血淋巴结中遇到的有一种悬浮的绿色吸呼色素沉积。血蓝血清含两个人可以连入多肽链的铜阴阳离子，与铁元素的赤红血清像，它有利氧组合，也易与氧解离，是如图所示的独一可与氧可逆性组合的铜血清，氧化物时呈金黄色，修复时呈白。其分子式量45０ ０00～１30 000。鉴于KLH比BSA有更高些的抗体原性，因其是常被选用的的载体血清。
用SMCC来制得抵抗能力-酶还半抗进行漫画作品的创作媒体的蛋白酶酶质，往往根据2步分解成法。过程一，包含氨基的蛋白酶酶质与一倍的偶联剂反馈，反馈完结后根据脱盐柱还透析的办法清除还没有反馈完的SMCC。接着，再与含带巯基的血清质发生反应。在实际情况方法需要主意的是，SMCC怕天气潮湿，保管时要和干热剂一块儿保管。另外选用中从冰箱冷藏放进过后要先在房间外放在一截准确时间平稳室温，一旦然后打开，水汽再生水分遇寒初凝，严重破坏SMCC 结构特征。
1、 将 20 mg SMCC（她是连接40条多肽的量）溶解于2 ml DMF。
2、 将0.8 ml KLH建立到25 ml圆底烧瓶中，补加1×PBS(pH 7.2)使核蛋白终氧化还原电位为 15 mg/ml。
3、 将溶水好的SMCC液体放缓中滴加到120 mg KLH 血清体系中中，制冷均匀搅拌体现1h。
4、 用1 L 1×PBS (PH 7.4) 稀硫酸于4℃下透析 6 小时左右，除了自由的SMCC。
5、 将透析后的KLH血清放到50 ml离心分离分离分液漏斗，确认离心分离分离管的刻度盘确定好其比热容，表明反映前加如的KLH核蛋清的量来确定透析后核蛋清的氨水溶液浓度，第二步据其氨水溶液浓度将2.5 mg KLH-SMCC饱和溶液转入到5 ml离心分离管内。
比如说：反映前放入KLH血清的量为120 mg，透析后的KLH蛋清体积大概为20 ml，但是透析后的KLH蛋白质浓 μl KLH-SMCC溶剂变动到5 ml离心法管内。
6、 将 3.0 mg 多肽用 0.6 ml 1×PBS (pH 7.2) 硫酸铜溶液容解。
要留意：在这多秤量出0.5 mg多肽是来用作做ELISA验测的，取下100 μl能够。测试多肽随热塑好的抗原共同寄出，浓硫酸浓度为5 mg/ml。
7、 用Ellman制剂检验多肽中的巯基：在96孔板里加入100 μl Ellman化学药品贮备液，加个入10μl多肽硫酸铜溶液，用Nano分光光度计在λ=412 nm下测其UV紫外线吸取值，若OD值>0.15做 下那步；OD值<0.15并>0.05补加多肽，必定会满足规定；OD值<0.05重返多肽人工部骤进行质控。
Ellman化学制剂是可以查重徘徊巯基的，如查重液显米黄色阐述多肽的Cys的巯基大方面以散布态会出现；假如检验液不显土黄色则讲解多肽Cys中的巯基就已经被阳极氧化成型二聚体或多聚体。
8、 将多肽液滴入到KLH-SMCC管上，室内温度下使用垂线混匀器混匀反响4小时左右。
9、 用Ellman微生物培养基检测工具多肽中的巯基：在96孔板里加入100 μl Ellman制剂自给率液，多加入10 μl 健身教练后的多肽饱和溶液，用Nano分光光度计在λ=412 nm下测试紫外光释放值。OD值<0.03讲解多肽和KLH淀粉酶热塑率已高于80%以下；OD值>0.03则再补加SMCC碱化好的KLH核蛋白延续交连。若Ellman生化试剂显红色就说明多肽与KLH蛋白酶偶联不几乎；要Ellman免疫试剂不显茶色则这说明多肽以及所有与KLH淀粉酶偶联。
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（一））：生态学素交联免疫试剂
Biotinylation Reagents生物技术素化化学药品
Sulfo-NHS-Biotin CAS Number: 119616-38-5
NHS-Biotin ; CAS Number: 35013-72-0
Sulfo-NHS-LC-Biotin CAS Number: 127062-22-0
NHS-LC-Biotin CAS Number: 72040-63-2
Sulfo-NHS-SS-Biotin CAS Number: 325143-98-4
NHS-SS-Biotin CAS Number: 142439-92-7
Biotin Hydrazide ; CAS Number: 66640-86-6
Biotin-HPDP CAS Number: 129179-83-5
Iodoacetyl-LC-Biotin CAS Number: 93285-75-7
（二）Heterobifunctional Crosslinkers异形双实用功能化学交联剂：
SMCC Crosslinker CAS Number: 64987-85-5
Sulfo-SMCC Crosslinker CAS Number: 92921-24-9
Sulfo-SANPAH Crosslinker CAS Number: 102568-43-4
SMPH Crosslinker
PDPH Crosslinker
MBS Crosslinker CAS Number: 58626-38-3
Sulfo-MBS Crosslinker
SPDP Crosslinker CAS Number: 68181-17-9
LC-SPDP Crosslinker
Sulfo-LC-SPDP Crosslinker
SIA Crosslinker ; CAS Number: 39028-27-8
SBA Crosslinker CAS Number: 42014-51-7
SMPB Crosslinker CAS Number: 79886-55-8
BMPS Crosslinker CAS Number: 55750-62-4
EMCS Crosslinker ; CAS Number: 55750-63-5
GMBS Crosslinker CAS Number: 80307-12-6
ANB-NOS Crosslinker CAS Number: 60117-35-3
Homobifunctional Crosslinkers同型双系统化学交联剂：
BS3 Crosslinker CAS Number: 82436-77-9
DSS Crosslinker CAS Number: 68528-80-3
BS2G Crosslinker
DSG Crosslinker CAS Number: 79642-50-5
DSP Crosslinker CAS Number: 57757-57-0
DTSSP Crosslinker CAS Number: 81069-02-5
Sulfo-EGS Crosslinker CAS Number: 167410-92-6
EGS Crosslinker CAS Number: 70539-42-3
DST Crosslinker CAS Number: 62069-75-4
Zero-Length Crosslinkers - EDC-HCl, Sulfo-NHS & NHS：
EDC-HCl CAS Number: 25952-53-8
Sulfo-NHS CAS Number: 106627-54-7
Deuterated Crosslinker BS3-d4
Deuterated Crosslinker BS2G-d4
Deuterated Crosslinker DSS-d4
（三）：Protein modification regents （蛋清遮盖相关内容化学制剂）
Protein Modification Reagents 球营养素绘制剂：
SATA Protein Modifier
N-Succinimidyl-S-Acetyl-Thioacetate
CAS Number: 76931-93-6
Sulfo-NHS-Acetate
CAS Number: 152305-87-8
Traut's Reagent
CAS Number: 4781-83-3
HPG
CAS Number: 24645-80-5
Iodoacetic Acid
CAS Number: 64-69-7
BMPA Modifier
CAS Number: 7423-55-4
（四）Immobilization Resins固定不动化硅胶粘合剂
Immobilization Resins固定住化光敏树脂
Amino-Reactive Resin
Sulfhydryl-Reactive Resin
Carbohydrate-Reactive Resin
Carboxyl-Reactive Resin
Immobilized Pepsin
Immobilized Chymotrypsin
【交连剂的应运】：
上皮细胞核节构科研
蛋白酶质的结构探讨
营养物质质间上下级做用钻研
生物技术分析（靶向药物**）
膜蛋白质蛋白质与半抗原的对接
蛋清质或各种团伙的固相化
表面抗原的标出、标出转出
核苷酸质与核酸的拼接
核苷酸质突显等
【确定热塑剂应考虑的关键因素】：
表现特情人
症状偏向性
间臂长宽高性
水可溶性
透膜性
另一种或四种症状基团
热反映依旧光电产品反映
可以不可以掐断
是否碘标
【可与化学交联剂反映的基团】：
矿酸氨基（赖氨酸ε或N末端的氨基）
巯基（半胱氨酸）
羧基（天冬氨酸，谷氨酸，最末端羧基）
羟基（丝氨酸或苏氨酸）
酮基，醛基，糖链
苯酚发展物（苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸）
蔓延性基团: R-N3
以上内容出自于编辑zhn2020.10.30
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