绿色荧光素标记牛血清白蛋白BSA-FITC合成详细步骤
纯天然荧光符号牛血清正球核蛋白的基本策略都可以基准荧光符号免疫免疫抗体的基本策略,是因为免疫免疫抗体也有的是种球核蛋白,基本基本策略如下所示:
安排用料:
1、异硫氰酸荧光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)异构体I(IsomerI),M.W:389.4发射点光谱分析图(降解光谱分析图)493nm,荧光光谱图550nm
2、牛血清正蛋白酶(BSA),M.W:68000,色度98%。(AlbuminBovineSerum)
3、记号储存液:0.5MpH9.5C.B,洗刷液:0.01MpH7.2PBS
标出环节:
1:将待热塑的蛋白质(有机废气浓度³1mg/ml)对热塑作用液透析三四次4 ℃,至pH=9.0。热塑作用液调配具体方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,兑水定容至1 L。
2:将FITC互溶DMSO中,氨水浓度为1mg/ml。总是 化学交联食用的FITC均应优质制备,背光。
3:按P:F(蛋清质:FITC)=1mg:150μg 的标准将FITC慢慢加入到于表面抗原稀硫酸中,边加边悄悄地幌动使其与表面抗原混合型粗糙,暗处4 ℃反應8 hr。
4:参加5mol/L的NH4Cl至终含量50mmol/L, 4 ℃撤消发应2 hr。
5:将交连物在PBS中透析数次左右,至透析液清亮。
6:化学交联物的鉴定费F/P的比例: ,该值应数为2.5 ~ 6.5两者。
7:FITC热塑的核蛋白应放于pH7.4的磷酸抗震液中,参加0.1% NaN3、1% BSA,4℃暗处保留。