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绿色荧光素标记牛血清白蛋白BSA-FITC合成详细步骤
发布时间:2020-08-25     作者:Harry   分享到:

墨绿色荧光符号牛血清正淀粉酶的做法能够参考价值荧光符号免疫抗体阳性的做法,是因为免疫抗体阳性也不是种淀粉酶,准确做法如下所示:


准备工作产品:


1、异硫氰酸荧光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)异构体I(IsomerI),M.W:389.4发射成功光谱图仪(消化吸收光谱图仪)493nm,荧光光谱仪550nm

2、牛血纯洁血清(BSA),M.W:68000,溶解度98%。(AlbuminBovineSerum)

3、标识缓存液:0.5MpH9.5C.B,过柱液:0.01MpH7.2PBS


标示过程:


1:将待热塑的球蛋白(溶液浓度³1mg/ml)对热塑反馈液透析多次4 ℃,至pH=9.0。热塑反馈液调制的方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,兑水定容至1 L。

2:将FITC易溶于DMSO中,溶液浓度为1mg/ml。每回交连动用的FITC均应新颖配比,阴凉。

3:按P:F(淀粉酶质:FITC)=1mg:150μg 的比率将FITC速度慢假如于免疫抗原氢氧化钠溶液中,边加边轻松摇动使其与免疫抗原混合物更加均匀,暗处4 ℃生理反应8 hr。

4:倒入5mol/L的NH4Cl至终酸度50mmol/L, 4 ℃中止作用2 hr。

5:将交连物在PBS中透析两次大于,至透析液清亮。

6:热塑物的认定F/P标准:  ,该值应对应2.5 ~ 6.5直接。

7:FITC热塑的血清应居于pH7.4的磷酸响应液中,填加0.1% NaN3、1% BSA,4℃暗处存有。