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​5-CFDA-SE,5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯,反应步骤
发布时间:2025-11-20     作者:axc   分享到:

5-CFDA-SE,5-羧基二乙酰化荧光素蜜腊酰亚胺酯,反应步骤

5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯(5-Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester,5-CFDA-SE)是一种功能化荧光前体分子,结合了二乙酸酯保护的羟基和琥珀酰亚胺酯(NHS)活性端。分子在未水解状态下低荧光性,适合穿透细胞膜或与生物大分子反应。进入细胞或缓冲体系后,二乙酸酯基被酯酶水解,释放出带羧基的荧光素,而琥珀酰亚胺酯端可与氨基或其他亲核官能团形成稳定的共价连接,实现荧光标记和功能化。该分子广泛用于细胞成像、蛋白质标记、载体修饰及分子示踪实验。

2. 化学结构特点
5-CFDA-SE分子主要包含三个功能部分:

  1. 荧光素骨架:出示平衡共轭工作体系,保证墨绿色荧光使用成功(引起约490 nm,使用成功约520 nm),量子劳动生产率高。
  2. 二乙酸酯确保基:修饰语荧光素羟基,屏弊负正电荷,增进团伙脂可溶,以便于人体细胞核透过。
  3. 虎珀酰亚胺酯(NHS)端:算作化学活化位点,可与蛋白酶质、肽链或一些含氨基的分子结构成型酰胺键,确保共价标记符号。

3. 反应步骤
5-CFDA-SE的制备和应用主要包括以下步骤:

(1)荧光素羟基乙酰化
  1. 荧光素分子结构中的羟基在有机物高沸点溶剂中与乙酸酐或乙酸乙酯症状。
  2. 在的催化剂的作用剂或酸碱性必要条件下,羟基与乙酸酐会发生酯化,形成了二乙酰化副产物,闭屏羟基负自由电荷。
  3. 反映转成的二乙酰化荧光素可利用柱层析或重凝结纯化,提升高含量里边体。
(2)羧基活性行成NHS酯
  1. 二乙酰化荧光素的5-羧基在有机的溶液内加入N-羟基琥铂酰亚胺(NHS)和碳二亚胺类纯化剂(如DCC或EDC)。
  2. 羧基在滋养剂帮助下养成O-酰化中体,继而与NHS构建导出琥铂酰亚胺酯。
  3. 生成二维码的5-CFDA-SE确认柱层析或重结晶体开展纯化,可以获得可靠的特异性有机物。
(3)记号与应用
  1. 将5-CFDA-SE溶解度于干热有机质萃取剂(如DMSO或DMF)中,与学习目标分子式(含氨基的核营养物质或平台)生理反应。
  2. NHS上方羰基碳被要求分子结构的氨基亲核攻击,成型稳定的的酰胺键,保持共价标签。
  3. 若用于内部膜内示踪,分子结构步入内部膜后,酯酶电离二乙酰基,发出带羧基的荧光素,造成墨绿色荧光警报,可根据高倍显微镜或普鲁士蓝染色内部膜术检查。
4. 的反应提前准备重大事项
  • 制取和食用进程中需解决含水量,慎防NHS端电离。
  • 酯化和NHS碱化流程需调节温湿度和pH,以确认结果色度和活力。
  • 补充应超低温背光,以保持着荧光稳定可靠性和化学上稳定可靠性。

产品名称:5-羧基二乙酰化荧光素虎珀酰亚胺酯

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