概述
sulfo-Cyanine5 dUTP是一种功能化荧光核苷酸,由脱氧尿苷三磷酸(dUTP)与sulfo-Cyanine5荧光染料共价连接而成。该化合物通过保留dUTP的天然性质,使其能够被DNA聚合酶掺入DNA链,同时通过Cyanine5荧光提供强烈的红光信号。sulfo修饰增加了染料的水溶性和稳定性,适合在多种实验条件下使用。
实验应用
sulfo-Cyanine5 dUTP常用于DNA标记、探针制备和细胞周期研究。通过在DNA复制过程中掺入该核苷,科研人员可以实现新合成DNA的荧光可视化。在原位杂交(FISH)实验中,它可用于标记目标DNA序列,实现空间分布和表达水平的观察。此外,结合多重荧光成像技术,sulfo-Cyanine5 dUTP能够与其他不同波长荧光标记同时使用,支持多重检测实验。
优势特点
该化合物的荧光染料具有良好的光稳定性和亮度,sulfo修饰增强了其在水溶液中的溶解性,减少非特异性结合,提高实验信噪比。Cyanine5的发射波长适合红光通道,能够在复杂样本如细胞或组织切片中实现低背景信号检测。与传统荧光核苷相比,sulfo-Cyanine5 dUTP在细胞成像和DNA分析中表现出更稳定和可重复的信号。
实验注意事项
实验操作中应注意避免荧光漂白,可在暗处储存和操作。掺入效率取决于DNA聚合酶类型和反应条件,应根据实验要求优化反应体系。在细胞或组织成像实验中,合理选择掺入时间和染色条件,可以获得均匀、稳定的信号分布。
研究价值
sulfo-Cyanine5 dUTP广泛应用于DNA复制监测、细胞周期分析、核酸标记及探针制备等领域。通过可视化DNA的合成和分布,它为分子生物学研究提供了直观、可靠的数据支持。红光荧光信号低背景、稳定性高,使其在高通量和多重标记实验中具有良好的应用潜力。
总结
总体来看,sulfo-Cyanine5 dUTP是一种高亮度、水溶性增强的荧光核苷衍生物。其兼容DNA聚合酶掺入机制和稳定的红光荧光信号,使其在DNA标记、细胞追踪和分子研究中发挥重要作用,是生命科学研究中常用的实验工具。