CY5.5-E2，花菁染色剂CY5.5标出雌二醇的炼制策略

CY5.5-E2 是一种将甾体激素雌二醇（E2, 17β-estradiol）与花菁染料CY5.5偶联得到的近红外荧光探针。雌二醇分子为甾体骨架，分子式C18H24O2，具有典型的甾体四环结构，并含有C3和C17位置的两个羟基官能团，具有较强的亲核性和化学修饰潜力。CY5.5则是具有强烈近红外荧光发射的花菁染料，激发波长在675 nm左右，发射波长约695–710 nm，具有较低自发荧光干扰和较高组织穿透能力。通过将雌二醇与CY5.5偶联，得到的CY5.5-E2兼具甾体分子的结合特性与光学可视化能力，可作为雌激素相关研究中的光学示踪探针。

分解方法原因雌二醇有效两只羟基，但其中C3位苯环上的酚羟基吸附性酶类越来越高，常成为偶联位点。CY5.5常以温顺酯（如CY5.5-NHS ester）或同一研究化的形式给出反馈吸附性酶类基团。获得总体目标包括有三条：就直接将雌二醇的羟基与CY5.5生动活泼酯发应，生成酯键或碳酸酯键；可以通过导入里头插头（如虎珀酸酐、PEG linker）先对雌二醇羟基做出掩盖，再与CY5.5-NHS偶联。然后种玩法最常见于提升水可溶与的空间具备灵可溶性高性。分解方法流程概要雌二醇活性体现称取适量的雌二醇，溶水无水吡啶或DMF氢氧化钠溶液中。向影响液中加入适量琥铂酸酐（Succinic anhydride）及催化发应的作用剂（如DMAP），在高温或略变热（25–40 ℃）状况下影响数天，使C3位羟基被突显转成雌二醇-半琥铂酸酯（E2-succinate）。粗结果经乙酸乙酯萃取法后，用硅橡胶柱纯化获取带着羧基的E2衍生品物。该方法流程的关健是决定性地装饰C3羟基，而抹去C17羟基的数据完整性性。雌二醇-活性酯制取将E2-succinate易溶无水DMF中，建立EDC·HCl与NHS，不良反应数天以将末梢羧基流量转化为生动活泼酯（E2-succinate-NHS ester）。该布骤绘制的在期间体存在较高的表现亲水性，要在无水、背光情况下临时性操作，杜绝水解反应解离。与CY5.5偶联将CY5.5-amine 或 CY5.5有点伯胺基团的具象化物混溶DMF，慢慢的建立E2-succinate-NHS ester硫酸铜溶液，在强碱减慢（如DIPEA有下）生理反应。进行酰胺键拼接保证 雌二醇与CY5.5的共价偶联。此不良反应普通需混合12–24一小时，维持遮光条件避免止活性染料光脱色。影响停止后，粗物品经旋蒸删去液体，再融化于甲醇/水分层液，去分式的运算除盐补救。纯化将粗终产物经反相C18柱层析或制取型HPLC纯化，的使用水（含0.1%三氟乙酸）/乙腈均值洗刷。CY5.5很强烈的近红外吸收率性能特点可在675 nm测试终产物峰。纯化后回收相匹配类物质，冻干收获CY5.5-E2固态物体咖啡豆，一般性呈深红或紫色。表现UV-Vis光谱仪：造成CY5.5优点溶解峰（~675 nm）与雌二醇紫外线溶解峰（~280 nm），这说明此二者依照。荧光光谱仪：抑制可见光波长675 nm，导弹发射在695–710 nm之中，保护CY5.5性能。质谱（MALDI-TOF或ESI-MS）：原子铁离子峰对照的理论原子量，核定偶联成就 。NMR（¹H, ¹³C）：雌二醇骨架的甾体4g的卫星信号与染剂清香4g的卫星信号均可判断到，C3位羟产品子4g的卫星信号变大，讲解偶联出现。HPLC介绍：唯一峰证明书溶解度>95%，更适合菌物试验使用的。汇报总结CY5.5-E2的制法基本包括6个时间段：雌二醇羟基的虎珀酰化装饰、羧基的NHS产甲烷及及与CY5.5的酰胺键偶联。该分解成规划不单衡量了甾体骨架的完整版性，还完成添加超材料对接臂增强了探头的维持性和水可溶性。纯化依靠于制法型HPLC，表现融合光谱仪学和质谱，终荣获高溶解度的CY5.5-E2，为设计孕激素药融合阶段与分布点展示 数据可视化机器。

产品名称：CY5.5-E2，花菁颜料CY5.5标上雌二醇

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