CY3-Collagen-v,花菁染料CY3标记胶原蛋白V型的注意事项
CY3-Collagen-v,花菁活性染料CY3标签胶原球蛋白V型的重视特别注意
Cy3-Collagen-V是一种将花菁染料Cy3与胶原蛋白V型(Collagen type V, Collagen-V)通过共价偶联形成的荧光标记分子,用于细胞成像、组织工程及细胞-外基质相互作用研究。胶原蛋白V型属于纤维型胶原家族,是细胞外基质的重要组分之一,常与胶原I型共组装,参与纤维形成和组织结构调控,其分子由α1(V)和α2(V)链组成,形成三股螺旋结构。Cy3是一种红橙色荧光染料,结构为两个芳香环通过多亚甲基链共轭连接形成平面共轭体系,具有强吸光性(λmax约550 nm)、高量子产率及优异光稳定性,能够在荧光显微镜下提供清晰可见的信号。Cy3-Collagen-V通过化学偶联在保持胶原V型三螺旋结构和生物学功能的同时,实现分子级荧光示踪。
光催化原理的方式素材开始准备化学合成Cy3-Collagen-V需提交的塑料原材料包含高纯净度胶原V型(一般来说原因于人或节肢动物组织开展重组方案淀粉酶)、Cy3活力性发展物(如Cy3-NHS酯)、碳酸氢盐响应液或PBS响应液(pH 7.4–8.0)、无水有机物容剂(如DMSO,代替溶于Cy3-NHS)及通常去阴阳离子水。的反应整个过程中需保护温度过低(0–4℃)以保护胶原淀粉酶的三級构成安全稳定。胶原V型预操作将胶原V型析出于低质量浓硫酸浓度的缓解液中(如0.1 M NaHCO₃,pH 7.8),使球核苷酸更加充分析出并提高三雷韵构型。缓解液条件需尽可能的防止发动机组升温高盐、较高温度或端pH,尽可能的防止发动机组升温止球核苷酸转化或化学纤维聚合。水溶液质量浓硫酸浓度一般是设定在1–2 mg/mL以提高表现一致进行。Cy3水解与修改Cy3-NHS酯或Cy3-ITC溶化于少量出DMSO中建成高渗透压颜料存量液。随即将颜料放缓下载胶原V型盐溶液中,确保安全生产质量比不大于总发生症状组织体制的10%,应对有机的高沸点溶剂对核氨基酸构成产生干挠。发生症状摩尔比平常管理在1:10至1:20(Cy3:胶原V型赖氨酸残基),以保持理性化标志并留下核血清工作。偶联响应搭配硫酸铜溶液在0–4℃下慢慢地拌和响应2–12小時,始终维持加载液pH在7.4–8.0两者,使Cy3-NHS酯与胶原V型赖氨酸氨基生成平稳的酰胺键。响应准确时间和工作温度的管理可解决胶原血清三螺旋运动空间结构的破碎,而且加强组织领导加以偶联。纯化与弄掉游离于有机染料的反应完毕后,实用透析(原子核量截掉约10–12 kDa)、凝胶的作用脱水或反渗透装置柱除去未融合的Cy3活性染料及小原子核副结果。透析降低液基本为PBS或低盐降低液,环境温度做到在4℃,一直数小的时候至一晚,就此外饱和溶液无突出颜色等等。高质量检测报告工具与储藏纯化后的Cy3-Collagen-V可进行UV-Vis吸收能力光谱仪分析和荧光光谱仪分析旋光度的测定图标有效率和荧光属性。SDS-PAGE或疑胶固色可评价蛋白酶详尽性及偶联均一性。图标后的产品可在响应液添加入几瓶甘油或剂(如DTT几瓶)安稳上传于-20℃或-80℃。需注意相关事宜掌控Cy3与胶原V型摩尔比,减少太过标上使得荧光淬灭或蛋清降解。始终保持温度和适合pH,以保养胶原三旋螺组成部分和自主装特性。纯化布骤需彻底解决去掉游离子染剂,以才能减少原型荧光侵扰。工作小结Cy3-Collagen-V在Cy3-NHS酯与胶原血清V型的赖氨酸残基偶联造成比较稳定酰胺键,分离纯化时候中统筹兼顾荧光标志和血清质组成部分恢复。该分离纯化最简单的方法有血清预治理 、荧光有机活性染料融掉与加入、缓存前提下偶联发应、纯化去掉悬浮有机活性染料及线质量测量。冶炼金属的Cy3-Collagen-V含有荧光示踪实用功能,可于细胞膜成相、集体工程项目及微条件科研,为胶原涉及生态学学科研供给高灵敏性、交互的测试用具。产品名称:CY3-Collagen-v
溶解度:95%+物理性质:固状或药液贮藏状态:-20°C粗糙闭光保管再生样式:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提拱)公司:杏彩体育平台 生态学