CY7-Fetoprotein，CY7甲胎蛋白的反应条件控制方法
CY7-Fetoprotein，CY7甲胎蛋白质的反應情况抑制步骤
CY7-甲胎蛋白（CY7-Fetoprotein, CY7-AFP）是通过将近红外荧光染料Cyanine7（CY7）与甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein, AFP）偶联得到的一类荧光标记蛋白复合物。AFP是一种分子量约70 kDa 的糖蛋白，含有多个赖氨酸残基的ε-氨基和较少的半胱氨酸巯基，这些功能基团为其提供了与荧光染料衍生物反应的位点。CY7作为典型的近红外荧光染料，具有长波长激发与发射、高组织穿透力和低背景信号等优势，偶联后得到的CY7-AFP可用于体内外成像、蛋白定位研究以及高灵敏度检测实验。
在实现CY7-AFP的过程中中，重点工作步骤是将活性氧化的CY7双重性物与AFP的氨基或巯基发生特异反响。最常用的染剂行驶为CY7-NHS酯或CY7-马来酰亚胺（CY7-Maleimide），对应与赖氨酸氨基和半胱氨酸巯基反响。特定响应方法流程以下的：淀粉酶减慢液筹备 AFP需融解在适于的抗震指标体系中。若应用NHS酯符号，大多数应用无胺的抗震液，如0.1 M碳酸盐抗震液（pH 8.3）；若应用马来酰亚胺符号，则可以pH 6.5–7.2 的聚磷酸盐抗震液，以始终维持巯基活力。尽量避免应用含Tris或甘氨酸的抗震液，是由于其氨基会与NHS酯竞争与合作反馈。蛋清预处置在巯基标注方案设计中，若AFP巯基会出现二硫键情况下，必须要 先用和气的备份剂（如TCEP）工作，泄露轻松自由巯基，这样可以与CY7-Maleimide会出现反映。备份剂应在反映前祛除，为了防止与染剂竟争。活性酶颜料硫酸铜溶液安排CY7-NHS酯或CY7-Maleimide大多数以DMSO或DMF为相转移催化剂容解，酸度为1–10 mM。伴随活性染料分子结构易光固色，全部运营应遮光来进行。偶联不起作用将CY7衍生产品物推按尔比（常是5–20倍于AFP的摩尔量）加进到核球蛋白溶剂中，在阴凉状态下猛地混合型喂养。NHS酯与核球蛋白赖氨酸氨基的响应生理机制是：氨基的孤对网络战斗NHS酯的羰基碳，行成周围体中间的体，发挥NHS离去基团，终转换相对稳定性高的酰胺键。马来酰亚胺与巯基的响应生理机制为Michael暴击伤害，巯基做亲核体被攻击马来酰亚胺双键，转换相对稳定性高的硫醚键。作用必备条件把控好NHS酯发生反响精力基本上而言为0.5–2 h，摄氏度为环境温度；马来酰亚胺发生反响基本上在较短精力内顺利完成（30–60 min）。在这个方式中需杜绝高温润强光照，以保持稳固球蛋白吸附性和染剂稳固性。纯化步凑不起作用完毕后，相溶物中既包涵标出副产物，也含带未不起作用的游走纺织有机染色剂。长用的纯化技巧为妇科凝胶过虑层析（如Sephadex G-25）或超滤膜抽滤。纯化整个过程中，联系了纺织有机染色剂的AFP因原子核量越大而与游走纺织有机染色剂破乳，然后到高纯净度的CY7-AFP。研究方法分享标签副产物需可以通过红外光谱图仪-可看得出光谱图仪和荧光光谱图仪进行检测工具。CY7的获取峰约为750 nm，AFP的蛋清获取峰在280 nm，两者之间的参考值适用于折算标签转化率。基本上目的标签度为2–3个颜料分子结构/蛋清，以确认荧光走势強度而不作用蛋清功用。汇总：CY7-甲胎球蛋白酶质的化学合成依懒于NHS酯或马来酰亚胺产甲烷染色剂与AFP上氨基或巯基的共价偶联，整块影响整个过程例如减慢液进行、球蛋白酶质预除理、染色剂可溶性高，溶于水的、偶联影响、纯化与定性分析六大包括步奏。能够哪些步奏得以的CY7-AFP不禁要保持了AFP的球蛋白酶质性状，互相应有稳定性高的近红外荧光性状，为其在里面显像、原子核示踪与高快速度探测带来了了可靠性的平台。产品名称：CY7-Fetoprotein，CY7甲胎血清
纯净度：95%+相对性状：固态垃圾或液态体贮存条件：-20°C皮肤干燥背光另存打包技术参数：50mg 100mg 250mg 500mg（按需出具）制造商：杏彩体育平台 动物
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