CY7-Troponinl,CY7标记肌钙蛋白I的制备方法
CY7-Troponinl,CY7标注肌钙蛋白质I的制法具体方法CY7标注肌钙球球淀粉酶质I(Troponin I, TnI)是借助整整是红外荧光染色剂Cyanine7与TnI氧分子共价偶联产生的荧光塑料物。TnI是肌钙球球淀粉酶质塑料物中的调结亚工作单位,具体借助抑制功效肌动球球淀粉酶质与肌球球球淀粉酶质的双方功效房产调控肌缩小。CY7-TnI的分离纯化技巧需兼具染色剂偶联工作效率、球球淀粉酶质构象动态平衡性及荧光灵活性,基本选用温顺的响应体系建设和可以控制的耐腐蚀遮盖措施。准备方式可氛围四个重点环节:球蛋白融解与保护机制采用将纯化的TnI溶化在生理性缓解器液中(如PBS,pH 7.2–7.4),加强组织领导球血清组成完善、抗逆性做到。为了能增进表现效应,可不过要适加碳水化合物缓解器剂或NaCl调理亚铁离子的强度,同一尽量不要在使用高有机废气浓度恢复备份剂,为了防止受到破坏球血清构象。抉择适用的CY7产生物较常用的CY7标示生化试剂其中包括CY7-NHS酯和CY7-马来酰亚胺酯。会因为TnI外面含赖氨酸残基,CY7-NHS酯可实现酰胺化症状与球蛋清氨基偶联;若球蛋清含可泄露的半胱氨酸残基,则CY7-马来酰亚胺酯可以择性偶联产生比较稳定硫醚键。偶联反响前提在背光状况下,将CY7染色剂极慢倒入TnI液体中,达到不适合的摩尔比(一般是CY7与TnI为3–10:1),在制冷或4℃极慢搅伴4–12小的时候。pH需达到在普通或微酸性,以确定NHS酯或马来酰亚胺酯的活性酶,同一时间以防球高蛋白构象调整。体现结束与纯化影响尾声后,使用的透析(氧分子式量公款私存约3.5 kDa)或凝胶的作用过滤器出掉未偶联的游离于CY7氧分子式。可经由UV-Vis和荧光光谱仪评估方法标上有效率,并且评估方法淀粉酶型式的完整的性。标上后的CY7-TnI可冻干放置,或在温度缓解液中永久保存,以达到荧光可溶性和淀粉酶职能。模块和适用查证准备的CY7-TnI常见需参与功能模块查验,如长期保持对肌动蛋白质质-肌球蛋白质质塑料体的调结力量,并经由荧光显像根本标出匀称饱满、电磁波硬度不稳定性。可以通过下列办法才能得到的CY7-TnI具有特征荧光可视化分析的功能和血清质活性酶,要用于细胞膜标准或休外体系建设中对肌钙血清质I分子结构的动态图片探测和互为效应研究分析。含量:95%+遗传性状:气体或夜体存放标准:-20°C非常干燥阴凉保存文档内包装品种:50mg 100mg 250mg 500mg(按需展示)加工厂:杏彩体育平台
生物学