CY7-EGCG，CY7符号儿茶素的制得方法步骤

CY7-EGCG是以表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）为亲水多酚骨架，外接近红外氰ine7染料（Cy7，λ_abs≈740–760 nm，λ_em≈770–800 nm）的共轭物。EGCG含多酚羟基与C3位没食子酸酯结构，赋予良好的抗氧化与多点氢键作用；Cy7提供强近红外吸收/发射、较高摩尔消光系数与深组织穿透能力。通过在EGCG上引入可控的单一“锚定位点”（优选经C3邻位羟基进行间接衍生化）并接入短链或中等长度PEG间隔臂（如PEG3–PEG8），可在维持水溶性与减少自猝灭之间取得平衡。典型产物在水、PBS及含少量有机助溶剂（DMSO<5%）中可形成分散良好的单体或小聚集体，紫外-可见光谱显示Cy7特征峰，荧光量子产率略低于游离Cy7而稳定性优于直接酚-染料偶联。建议标记度控制在1:1（EGCG:Cy7），以兼顾光谱纯度与结构均一性。主要表征手段包括^1H/^13C NMR、HR-ESI-MS或MALDI-TOF、RP-HPLC纯度与保留时间、UV-Vis/PL光谱、动态光散射（如需）。

分离纯化形式（二步法，先添加胺手柄再与Cy7-NHS偶联）：具体步骤1（EGCG-PEG-NH2制得）：在闭光、皮肤干燥环境下，将EGCG溶解无水DMF（或DMSO），形成丁二酸酸酐（1.2–1.5 eq）与催化氧化量DMAP/TEA，于温度搅拌器2–4 h，取舍性组成EGCG-半琥铂酸酯（在酚羟基上形成–COOH）。作用液经心理减压除稀释剂后以水/乙酸乙酯提取或同时RP-HPLC半制得纯化，得EGCG-SA。后来用EDC·HCl/NHS（各1.1–1.3 eq）在pH 5.5–6.0的MES加载或DMF中碱化–COOH 20–40 min，形成H2N-PEG_n-NH2（n=3–6，1.0–1.2 eq），调pH至7.5–8.0，温度闭光作用2–6 h，达到以单端胺表露的EGCG-PEG-NH2。用脱盐柱或RP-HPLC纯化，冻干预留。步驟2（Cy7标记图片）：取Cy7-NHS酯（1.1 eq）溶水一定量无水DMF，滴入到含EGCG-PEG-NH2的0.1 M碳酸氢盐缓冲器/DMF混合物工作体系（v/v≈3/1，pH 8.3–8.6），总在机相不不低于30%。在N2与闭光条件下绞拌1–2 h（薄层或分折HPLC评估NHS峰没有与自动生成物峰自动生成）。反应迟钝提交后填加一定量甘氨酸淬灭残留物NHS酯，扑灭以水相为之主要的流失相，采取C18 RP-HPLC（均值：水/0.1%TFA-乙腈/0.1%TFA）转移，持续主峰并冻干，得CY7-EGCG（预料得率30–60%，饱和度>95%）。定量分析与贮存：认可大分子量（HR-MS），纪录λ_max与荧光发射点峰，计算公式标志度（A_750与A_280标定）。样本预包装于棕瓶，4 °C闭光另存，一年期制备成pH 7.4抗震液实用；长远可-20 °C冻干另存并规避不停冻融。

产品名称：CY7-EGCG，CY7标记图片儿茶素

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