CY7-lactoferrin，CY7标示乳铁蛋白质的聚合方法流程现状分析

CY7-lactoferrin 是将近红外花青染料CY7偶联到乳铁蛋白（Lactoferrin, ~80 kDa）表面的可反应侧链上所得的荧光蛋白探针。CY7具有740–760 nm吸收与770–790 nm发射的光谱窗口，能在复杂基质中获得低自发荧光背景与较深的穿透深度；乳铁蛋白则含有多处赖氨酸ε-氨基与少量半胱氨酸/二硫键位点，便于采用胺选择性或硫醇选择性策略实现标记。合理控制标记密度（degree of labeling, DOL）既可保持乳铁蛋白的构象与结合能力，又能获得稳定明亮的近红外信号，适用于载体构建、界面成像与微阵列固定化等研究场景。

自动合成操作步骤分析：①抗震液备好与去盐：将乳铁核核淀粉酶（1–5 mg/mL）引流至0.1 M碳酸氢钠抗震液（pH 8.3）或无胺PBS（pH 7.4），凭借脱盐柱或30 kDa反渗透膜剔除Tris、胺类固定剂、叠氮钠与材料螯合剂，防范限制生物酯体现。②生物酯胺化标出：取CY7-NHS酯（以无水DMSO配成1–10 mM储备量液），在闭光标准下按CY7：乳铁核核淀粉酶摩尔比3–8:1比较慢申请假如恰当至核核淀粉酶盐溶液（有机酸相覆盖率<10%），轻缓混匀，空调温度体现30–60 min。恰当的DIPEA并不是必须要，往往抗震液pH已充足的打造胺的亲核性。③淬灭与首次纯化：申请假如终溶液浓度10–20 mM的甘氨酸或Tris淬灭残余物NHS酯10 min；其次用Sephadex G-25凝胶的作用滤水或30 kDa反渗透膜（3–5次抗震引流）剔除自由染剂与小团伙。④优化纯化（要选）：如需更为重要溶解度与单减少性，可用到SEC-HPLC（溶解性盐抗震、等度或浅梯度方向）离心分离区别DOL的成分，抽取主峰并直接抗震引流回储藏系统。⑤DOL检测与质量水平控：记下A280与A750，根据CY7消光常数与乳铁核核淀粉酶本征吸附（并做对比度学较正）测算DOL，对方必设在1–3 mol dye/mol protein；做出本征PAGE/SDS-PAGE下的近红外荧光三维成像与考马斯脱色照表，根本无特别积聚或可降解；必须时用到DLS评价指标水合粒级与减少性。⑥代替位点定项策略（要选）：为改善位点选泽性，先用Traut’s reagent（2-iminothiolane，pH 7.5，30 min）在赖氨酸上引用巯基，再与CY7-maleimide做出硫-马来酰亚胺加上（pH 6.8–7.2，30–60 min），其次按以上所述注意事项纯化与定量分析。⑦储藏：原料闭光，4 °C而短时间内上传，长年可经灭菌滤水后申请假如10–20%甘油或者量糖原类冰冻维护剂，-20/-80 °C分开装袋冻存，防范复发冻融。以上所述注意事项标准温润、代用性强，有助于按规模化拖动并对DOL与构象固定量分析做到柔性化自我调节。

产品名称：CY7-lactoferrin，CY7标识乳铁球蛋白

含量：95%+特性：无水硫酸铜或粘液存放前提：-20°C干燥的背光包存进行包装规模：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提高）批发厂家：杏彩体育平台 生物体

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