Cy7.5-0valbumin,CY7.5标记卵清蛋白的反应步骤
Cy7.5-0valbumin,CY7.5标签卵清核蛋白的想法步凑
CY7.5-Ovalbumin 是将卵白蛋白(Ovalbumin, OVA)与近红外荧光染料 CY7.5 偶联形成的功能化蛋白。卵清蛋白是一种主要存在于鸡蛋清中的球状蛋白,分子量约 45 kDa,富含赖氨酸残基和 N-端氨基,为化学修饰提供了多个可反应位点。CY7.5 的近红外光学特性使其标记蛋白可用于活体成像、追踪实验及药物载体研究。
CY7.5-Ovalbumin 的典型的反映过程下面的:卵清血清的溶剂提供将卵清淀粉酶降解于女性生理减慢液或碳酸氢盐减慢液(pH 8.0–8.5),以调控淀粉酶质构象和特异性。淀粉酶质含量常常调控在 1–10 mg/mL,便售后均匀的偶联。氢氧化钠溶液中可非常合适修改螯合剂(如 EDTA)尽可能的防止发动机组升温铝合金阳离子影响力不起作用。CY7.5 特异性化治理CY7.5 一般说来以 NHS 酯或的羧基纯化类型会出现。若为羧酸类型,需使用 EDC/NHS 普通机械纯化生产 CY7.5-NHS 酯两边体,以加强与核蛋白氨基的亲核响应专业能力。纯化步骤一般说来在非常干燥充分溶剂(如 DMSO)中确定,并在环境温度下确保 30–60 20分钟,可以防止染剂挥发。偶联反映参与将滋养的 CY7.5-NHS ester 慢慢添加球蛋白酶酶悬浊液中,确保安全宽裕掺和以体现匀混合型喂养。偶联体现信任于卵清球蛋白酶酶面赖氨酸侧链和 N-端氨基的亲核性攻击速度羧基碳生成相对增强的酰胺键。体现一般来说在恒温或 4°C 具体条件下持续 1–4 1天,以持续球蛋白酶酶质组成部分相对增强并阻止非特情人分解。表现具体条件推广偶联生理体现的标签度可能会够 改善颜料与球蛋清酶的摩尔比参与精深设定。摩尔比过高可能会引起球蛋清酶质构象改善或集聚,摩尔比过低则荧光警报达不到。生理体现 pH 和降低盐浓度值同样的要点,通畅安全使用碳酸氢盐降低液或 PBS 参与可以调节,以保障酰胺化生理体现使用率和球蛋清酶保持稳定性比较处理。物质纯化不起作用完后,需的还原未不起作用的 CY7.5。选用办法其中包括透析、妇科凝胶过虑(如 Sephadex G-25)、反渗透装置或高高效液相色谱(HPLC)破乳。纯化的过程 持续低温环境以减少蛋白酶质男变女,另外恢复荧光4g信号硬度。终产物表现与贮藏纯化后的 CY7.5-Ovalbumin 可顺利通过红外光谱仪仪-明显可见的吸引光谱仪仪、荧光光谱仪仪各种 SDS-PAGE 等方案校验图标成功的 和图标度。类型图标血清吸引峰在 780 nm 两边,发送峰在 810 nm 两边。图标血清应阴凉、低温制冷的效果吸收(–20°C 干热或缓冲器液冻存),以增加荧光耐热性和血清质稳定的性。上面,CY7.5-Ovalbumin 的想法过程集中呈现蛋清水溶液筹备、CY7.5 吸附性化、亲核偶联、想法条件系统优化、代谢物纯化与表现及处理等关键所在的环节。利用精益求精操作有机染料与蛋清的比重和想法区域,可兑换荧光的强度增强、架构全面的标签蛋清,可用在于活体定位跟踪、细胞膜激光散斑及海洋生物团伙深入分析。产品名称:Cy7.5-0valbumin,CY7.5标志卵清淀粉酶
色度:95%+相对性状:固状或粘液上传前提:-20°C吹干阴凉上传进行包装规格参数:50mg 100mg 250mg 500mg(按需带来了)产品:杏彩体育平台 生物体