CY5-聚乙二醇-过氧化氢酶是将荧光团通过PEG连接臂以温和、可控的方式共价接入酶表面，既保留催化活性又赋予可视化能力。总体策略：先将Cy5与一端功能化PEG连接得到 Cy5-PEG-X（X 为可与蛋白共轭的末端基，如 NHS 酯、maleimide、DBCO 等），随后选择与过氧化氢酶（catalase）可接受的共价化学在温和条件下偶联。典型步骤如下：1）前体制备：合成或购置末端活化的 Cy5-PEG-NHS（或 Cy5-PEG-maleimide）。用无光、无氧避光操作并以干燥溶剂保存。2）酶预处理：将商业或自制过氧化氢酶在冰上溶解于缓冲（如 PBS pH 7.4 或 7.2 的磷酸盐缓冲）并进行透析或凝胶过滤以去除甘油、盐类或胺类缓冲物，保证自由氨基/巯基可用。测定蛋白浓度（UV280或Bradford）与活性基线（H2O2 分解速率）。3）偶联反应：若用 NHS 酯，则在 pH 7.2–7.8 缓冲中，按目标染料:蛋白摩尔比（常用 3–10:1）加入 Cy5-PEG-NHS 至酶溶液，0–4°C 避光反应 30 min–2 h；若采用 maleimide 则需先将蛋白的自由巯基通过温和还原（若必要）暴露并在 pH 6.5–7.0 条件下进行。监控反应进程可用小取样 SDS-PAGE（在非变性条件下荧光扫描）或吸光/荧光光谱。4）终止与去除过量试剂：用甘氨酸或Tris 缓冲终止 NHS 反应（消耗游离NHS酯），随后通过超滤（Amicon，MWCO 30–100 kDa）反复稀释回收，或用凝胶过滤柱（Sephadex G-25/G-50）分离游离Cy5-PEG与标记酶。5）纯化与浓缩：实施 SEC（Superdex 200 等）实现高分辨纯化并同时更换终保存缓冲（含甘油或蔗糖以保护酶）。6）质量与功能验证：测定标记度（DOL，degree of labeling）——通过结合谱学（用吸收谱算出 Cy5 与蛋白质的吸光比并换算标记数），SDS-PAGE 荧光与考马斯染色比对；酶活性测定（测定 H2O2 降解速率，compare 标记前后）以评估活性保留率；动态光散射（DLS）或 SEC-MALS 检测是否产生聚集体；紫外-可见与荧光光谱记录光学特性。7）终配制与保存：在含0.02% 抗菌剂、低温避光冻存（-20 至 -80°C，或短期 4°C）并记录失活动力学。
小技巧：挑选短PEG（PEG3–PEG12）可限制区域位阻但能够会危害酶活；长PEG（PEG-5000）极为有益于大大减少非特异物理吸附但能够会遮蔽活力性位点。操作图标度以动平衡机多维分析警报与催化剂的作用力量（常取 DOL 1–3）。影响与纯化全流程阴凉、常温并便捷测评活力性，是有保障高水平量 CY5-PEG-Catalase 的关键所在。设备名称大全：Cyanine5-PEG-Catalase，CY5-聚乙二醇-过氧化反应氢酶含量：95%+物理性质：粉末状或药液存有标准：-20°C晾干阴凉存有内包装产品规格：50mg 100mg 250mg 500mg（按需带来了）批发厂家：杏彩体育平台 生态学
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