产品名称:Annexin V-FITC/PI
概述
Annexin V-FITC/PI是一种常用于细胞凋亡和死亡检测的双染试剂组合。Annexin V是一种能够特异性结合磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)的蛋白,FITC(荧光素异硫氰酸酯)与其共轭,使其在蓝光激发下发射绿色荧光。PI(碘化丙啶)是一种能够穿透细胞膜受损细胞并与DNA结合的红色荧光染料。通过同时使用Annexin V-FITC和PI,可在流式细胞术或荧光显微镜下区分早期凋亡细胞、晚期凋亡/坏死细胞及存活细胞。
作用原理
在健康细胞中,磷脂酰丝氨酸位于细胞膜内侧,而在早期凋亡细胞中,PS翻转至外侧膜表面,Annexin V-FITC即可特异性结合并发出绿色荧光。而PI无法穿透完整的细胞膜,因此仅在膜受损的晚期凋亡或坏死细胞中染色并发出红色荧光。通过双染,细胞可分为四类:存活细胞(Annexin V-FITC阴性/PI阴性)、早期凋亡细胞(Annexin V-FITC阳性/PI阴性)、晚期凋亡或坏死细胞(Annexin V-FITC阳性/PI阳性)及偶见的单独PI阳性细胞。
应用范围
Annexin V-FITC/PI广泛应用于流式细胞术和荧光显微镜实验,用于检测细胞凋亡率、评估药物或处理对细胞生存状态的影响。它可用于多种哺乳动物细胞、免疫细胞、肿瘤细胞和原代细胞的检测。同时,也可用于组织切片凋亡检测及联合其他荧光标记进行多参数分析。
实验注意事项
染色实验应在避光条件下进行,以防FITC荧光淬灭。细胞悬液应保持均匀并避免高浓度离心导致细胞受损。Annexin V-FITC/PI染色通常在生理盐水或含钙缓冲液中完成,因为钙离子是Annexin V结合PS的必要条件。实验完成后应尽快进行流式检测或显微观察,以保证数据的准确性。
优势特点
Annexin V-FITC/PI的双重染色策略简便直观,可同时区分早期凋亡和晚期凋亡/坏死细胞。其操作流程快速,结果可重复性高,且可与其他荧光标记组合使用,便于多参数细胞分析,为细胞生物学研究提供可靠工具。