分子结构与化学特性
AF555-Maleimide 由 Alexa Fluor 555 荧光核心与 Maleimide 官能团组成。Alexa Fluor 555 提供激发峰约 555 nm,发射峰约 565–570 nm 的橙红色荧光,具有高量子产率、高亮度和优异光稳定性。Maleimide 官能团专门与自由巯基发生 Michael 加成反应,形成稳定的硫醚键,从而实现高选择性共价偶联。与羧酸或 NHS 酯衍生物相比,Maleimide 衍生物能够在温和的缓冲条件下快速、特异性地标记蛋白质和小分子,尤其适合对结构敏感或功能易受影响的生物分子。
光学特性
AF555-Maleimide 属于橙红色荧光染料,激发峰约 555 nm,发射峰约 565–570 nm。其亮度高、光漂白耐受性强、发射谱窄,非常适合多通道联合检测实验。橙红色荧光在细胞及组织成像中自发荧光干扰低,有助于提高信噪比,适用于低浓度样品或复杂生物体系的高灵敏检测。良好的水溶性和缓冲相容性保证了在多种实验条件下的均匀分布和标记效率。
蛋白质半胱氨酸标记
AF555-Maleimide 可与蛋白质中的半胱氨酸残基选择性偶联,形成稳定的硫醚键。该方法可用于蛋白质荧光标记、动态追踪及蛋白质构象和互作研究。通过特异性标记半胱氨酸,可最大限度减少非特异性偶联,提高标记精确性和实验可重复性。
抗体和多肽偶联
Maleimide 衍生的 AF555 可与含巯基的抗体、多肽或小分子偶联,制备高亮度荧光探针。标记后的抗体在免疫检测(如免疫荧光染色、流式细胞术)中提供高信噪比信号,并可与其他荧光染料联合实现多通道检测。
活细胞及组织成像
AF555-Maleimide 标记的分子适用于活细胞或组织成像。橙红色荧光可与蓝色、绿色或远红色荧光染料联合使用,实现多通道、多参数成像。其高光稳定性保证了长时间动态追踪实验的可靠性,适合研究蛋白质动力学、细胞器定位和分子分布。
分子相互作用研究
AF555-Maleimide 可用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸或蛋白质-小分子相互作用研究。通过荧光强度变化、能量转移效应(如 FRET)或共聚焦成像,研究人员可以定量分析分子结合动力学和空间分布,为分子机制研究提供可靠数据。