类产商品名稱称：Sulfo-Cy5 alkyne，磺化CY5-炔基的运用技巧利用方案标识前的准备：目标值原子进行处理：血清质/核酸：切实保障目标值氧分子含叠氮基团（如根据分解标示或普通机械修饰语注入）。受损癌细胞/组识：如需活受损癌细胞标示，需使用SPAAC发应（避免出现铜毒素）。缓解液选取：个性化推荐储存液：PBS（pH 7.4）、HEPES（pH 7.0）或Tris-HCl（pH 7.5），防止含螯合剂（如EDTA）的储存液（CuAAC需铜亚铁离子）。加入剂：CuAAC：“添加CuSO₄（1-5 mM）和抗坏血酸钠（5-10 mM）用于铜催化反应剂和保存剂。SPAAC：不需放入剂，可以直接食用含环辛炔（如DBCO-Sulfo-Cy5）的实验试剂。标出表现：摩尔比：大多数Sulfo-Cy5 alkyne与梦想分子式的摩尔比是1:1-5:1（量过大颜料可挺高图标效果，但需后面纯化清理未作用颜料）。反应迟钝指标体系：CuAAC：将Sulfo-Cy5 alkyne容解于DMSO或DMF（终氨水浓度≤10% v/v），注入含指标氧分子和铜促使剂的储存液中，温度孵育1-2半小时。SPAAC：马上混合型含叠氮基团的梦想氧分子与含环辛炔的Sulfo-Cy5免疫试剂（如DBCO-Sulfo-Cy5），室内温度孵育30min至21天。想法结束：CuAAC：可以通过脱盐柱或透析彻底清除铜离子液体剂和未反應染色剂。SPAAC：不能自己解除，可以纯化。纯化与确认：纯化形式：透析：支持于大原子（如蛋清质）的纯化，去掉未生理反应颜料和小原子硫氰酸盐。凝胶的作用活性炭过滤：用Superdex 75或200柱脱离标签物质与未发生反应纺织染料。HPLC：反相HPLC（如C18柱）可高效、性价比最高分离出来记号多肽或小分子结构。校验方式 ：荧光查重：凭借荧光分光光度计或妇科凝胶显像设备手机验证符号结果的荧光射。SDS-PAGE：竞品记球高蛋白酶开展电泳讲解，观察动物荧光条带与球蛋白酶条带可否一样的。质谱：凭借MALDI-TOF或ESI-MS询问标记图片代谢物的原子核量变化。贴心提升：仅用在成果转化，不可以用在体内进行实验！wyh

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