Cy5.5-Protein A,花菁素染料cy5标记蛋白A的操作步骤
产品的名稱:Cy5.5-Protein A,花菁素染剂cy5箭头血清A的操作的过程操作的流程Protein A打算:将Protein A悬浊液(1 mg/mL)用PBS(pH 7.4)透析留宿,弄掉内在的杂质残渣。Cy5.5-NHS分解:将Cy5.5-NHS粉沫不溶无水DMSO(10 mg/mL),遮光永久保存(Cy5.5-NHS在水内易溶解)。标出体现:将Cy5.5-NHS溶剂逐中滴加入Protein A溶剂中(Cy5.5-NHS:Protein A=5:1摩尔比),悄悄的混匀。制冷背光打料1几小时(或4℃一晚,不良反应更温文尔雅)。撤销反响:填加10 μL 1 M Tris-HCl(pH 8.0)淬灭未作用的Cy5.5-NHS(Tris的氨基可竞争者性融入Cy5.5-NHS)。纯化:妇科凝胶滤水层析:选择Sephadex G-25柱,以PBS为外溢相,分離Cy5.5-Protein A与未不良反应的Cy5.5-NHS。透析:将不良反应液装进透析袋(MWCO 10 kDa),对PBS透析3次(每每4时间),删去小团伙沉淀物。溶度检测法:Bradford法:测定方法Protein A质量浓度(A₅₉₅)。红外光谱仪光谱仪法:A₆₇₅(Cy5.5)/A₂₈₀(Protein A)参考值计算方法标签成功率。范例:若A₆₇₅=0.8,A₂₈₀=1.0,则标注分配比例≈4 Cy5.5/Protein A。舒心系统提示:仅应采用教学科研,不会应采用身休科学试验!wyh