Biotin-cRGD,生物素-环肽的合成方法
设备名号:Biotin-cRGD,生物工程素-环肽的组成的办法生成的方法(1)固相合并法(SPPS)方法步骤1:分解成cRGD多肽环氧树脂考虑:Rink Amide树酯:制成电脑端酰胺(c(RGDfK)-NH₂)。Wang硅橡胶:出现电脑端羧酸(c(RGDfK)-COOH)。核苷酸偶联:由小到大偶联Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH等。环化:在赖氨酸侧链氨基与天冬氨酸羧基相互构成内酰胺键(使用的HATU/DIPEA滋养)。锯开树酯:TFA/TIS/H2O(95:2.5:2.5)打孔,的c(RGDfK)-NH₂或c(RGDfK)-COOH。步骤之一2:海洋生物素掩盖步骤1:同时淡化cRGD的氨基海洋生物素羧酸(Biotin-COOH)与c(RGDfK)-NH₂实现EDC/NHS纯化不良反应:溶于Biotin-COOH(1 eq)和EDC(1.5 eq)在DMF中,环境温度搅匀30分。倒入NHS(1.5 eq),再作用30小时。申请加入c(RGDfK)-NH₂(1 eq),pH 7.5-8.0,在常温症状過夜。HPLC纯化,的Biotin-c(RGDfK)。措施2:利用接触臂遮盖先自动合成Biotin-PEG₄-NHS(工业可购),再与c(RGDfK)-NH₂反响:溶解度Biotin-PEG₄-NHS(1 eq)和c(RGDfK)-NH₂(1.2 eq)在PBS(pH 7.4)中。在常温生理反应2小时左右,HPLC纯化。(2)高效液相合成视频法可适合用于于小占比提炼或繁多表达:及时生成动物素-PEG₄-COOH,再借助EDC/NHS与c(RGDfK)-NH₂偶联。好处:可明确把握响应水平(如pH、水温),少副燃烧产物。(3)纯化与分析方法纯化:反相HPLC(C18柱):拆分未反映的生物制品素或cRGD。分子式结构筛层析(如Sephadex G-15):的还原小分子式结构硫氰酸盐。研究方法:质谱(MS):填写碳原子量(如Biotin-c(RGDfK)的说法碳原子量≈1200 Da)。HPLC恢复時间:与未绘制cRGD比照,检验饱和度(>95%)。菌物素渗透性探测:根据ELISA或荧光极化调查校验与链霉亲和素的构建性能。浪漫信息提示:仅用来教育科研,是不能用来人体组织实验室!wyh