TNP-Guanosine 5'-triphosphate结构与荧光特性
物商品编码称:TNP-Guanosine 5'-triphosphate食品概述:
TNP‑GTP (2′,3′‑O‑(2,4,6‑Trinitrophenyl)guanosine‑5′‑triphosphate)是一种荧光标记的GTP类似物,常用于研究G蛋白、GTP酶及GTP结合蛋白的结构与动力学。
结构与荧光特性
TNP基团座落核糖的2′、3′‑羟基,对GTP的三磷酸机构大致不干挠。其相关系数的特征是在300–400 nm激励光波波长下能存在强荧光,发射点峰一般来说在550–600 nm地方,量子产出率高,荧光強度与综合感觉的变化很明显。应用方向
GTP结合蛋白检测与动力学分析
TNP‑GTP 与GTP结合蛋白相互作用时,其荧光会发生显著红移或强度变化,可用于测定结合常数、解离常数以及竞争结合实验分析。GTP酶活性监测
酶催化水解GTP的过程中,对TNP‑GTP的荧光信号变化非常敏感,可用于评估蛋白如RAS、Rab、Ran等GTP酶的活性与动力学参数。构象变化研究
蛋白结合TNP‑GTP时,荧光光谱变化反映核苷酸结合位点环境的疏水性变化与构象调整,用于分析蛋白-配体相互作用机制。
使用注意事项
浓度控制:TNP‑GTP 在高浓度下可能产生自淬灭,实验中一般使用微摩尔级。
缓冲体系:需保证pH7.0–7.5,避免高盐或具有强螯合作用的组分破坏荧光特性。
对照设计:常设立未结合TNP‑GTP作为空白,对比结合蛋白后的荧光变化。
优势与局限
优点:简便检测、非放射、安全性高;可以实时监测结合和酶活性;适用于高通量筛选。
局限:荧光信号可能受背景干扰;标记可能略影响GTP天然结合常数;不适用于所有GTP依赖蛋白。