mPEG-DBCO 修饰抗体的位点特异性结合与纯化流程
专著:操作碳原子分类的显像剂对*性*PD-L1*体市场定位参与多大小显像超链接://link.springer.com/article/10.1186/s12951-022-01272-5做者:艾里斯·M·哈格曼斯,彼得·J·维尔斯特拉卡斯·施图滕Janneke DM 莫尔肯波尔-库南,杜科·范·达伦马丁·特尔·比斯特约店翰·MS ·范德舒特奥尔加·伊琳娜马丁·戈特哈特卡尔·G·菲格多尔费伦茨·A·舍伦,桑德拉·赫斯坎普马丁·维尔多斯节选:位点特情人酶促组合整合后,食用0.5-1.0 mg*体(细节描写)和25 eq IH18或IH20对mIgG1 PD-L1动用自举例分选,食用50 eq IH18或IH20对Fab PD-L1动用自举例分选。用EDTA(终酸度为10 mM)中止化学发应后,将化学发应混杂物与200 µl Ni-NTA珠在环境温度下孵育二十分钟的英文,以删去未化学发应的*体和分选酶。食用空的翻转柱(Jena Bioscience,AC-552-25)将珠串从化学发应混杂物中离,并且用干洗减慢液(50 mM NaH 2 PO 4 .H 2 O,300 mM NaCl,20 mM 咪唑,0.05%Tween 20,pH 8.0)干洗两三次,用PBS干洗两三次。将化学发应混杂物和干洗级分合拼,并食用图片尺寸排阻色谱法(SEC)纯化,以 PBS 中的 1 mM EDTA 做减慢液(10 mL/min)。将内含乙酰乙酸的级分合拼,并食用 Amicon Ultra-15 离心分离滤过系统、MWCO 10 kDa(Merck,Z717185)精浓。食用无菌检测 PBS 动用减慢液相互交换。在 NanoDrop 上测试*体酸度,食用 UV-vis 流程,在 280 nm 处在线测量方法IH20,在 280 和 646 nm 处在线测量方法IH18。在回归状态下食用 SDS-PAGE 抑菌凝胶电泳(12% 丙烯酰胺)分析评估淀粉酶质含量,对比物料、乙酰乙酸和用 5 kDa mPEG-DBCO 点击进入的乙酰乙酸,以确认整个重链的特点化。每位营造体生产销售好多个院校代号线,并在动用身体之外和体内的实验所之后将哪些院校代号线合拼,以有效确保院校代号线饱满性。食用体积测试法量淀粉酶质含量。在ImageJ中动用体积测试,举例为(乙酰乙酸条带-的时代背景)/(非乙酰乙酸条带-的时代背景)×100%。含量mIgG1 PD-L1-IH18 = 85%,Fab PD-L1-IH18 = 96%。