DOPE-PEG-Biotin在巨型单层囊泡膜构建中的应用研究
资料:脂质膜上的水分子主装条件联接://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5作家:卡斯帕· 范德韦尔1∙多丽丝 ·海因里希1,2∙丹妮拉·J· 1克拉夫特1节选:化学工业品苯丁二烯 (99%)、衣康酸 (99%)、4,4'-偶氮双 (4-氰基戊酸) (98%)、D-夏黑葡萄糖粉 (99%)、牛血清廉球蛋白质 (98%)、甲醇 (99.9%)、氯仿 (99%)、磷酸钠 (99%)、钝化氘 (70%)、N-羟基磺化蜜腊酰亚胺钠盐 (98%) 和 1,3,5,7-四甲基-8-苯基-4,4-二氟硼氮杂引达省苯 (97%, BODIPY) 购自 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO;甲氧基聚(乙二醇)胺 (mPEG, M W = 5000) 购自 Alfa Aesar;氯化钠 (99%) 和叠氮化钠 (99%) 购自 Acros Organics; 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺硫酸盐 (99%),来 Carl Roth;NeutrAvidin (*微菌物工程体素球蛋白质) 和霍乱毒物 B 亚基 Alexa Fluor 488 组合物 (霍乱毒物 488),来 Thermo Scientific;DNA 寡核苷酸 (微菌物工程体素-5′-TTTAATATTA-3′-Cy3),来 Integrated DNA Technologies;以其来Avanti Polar Lipids机构的Δ9-顺式1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙酸乙酯胺-N-(微菌物工程体素基(聚乙二醇)-2000) (DOPE-PEG-微菌物工程体素)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙酸乙酯胺-N-(丽丝胺罗丹明B磺酰基) (DOPE-罗丹明)和G M1运动神经节苷脂(GM1)。那些物理化学试剂均按原样选用。那些实验设计均选用选用Millipore过虑平台(Milli-Q Gradient A10)刷出的电阻值比率18.2 M Ω cm的去铝离子水。膜配制按照原则电变大系数枝术制取长度为 5 至 20 μm的巨形三层囊泡 (GUV) ( 14 )。在氯仿中制取 2 g/L 的脂质混合式型物,其由 97.5 wt.% DOPC、2.0 wt.% DOPE-PEG-生物学素和 0.5 wt.% DOPE-罗丹明构造。下面来,取 10 μL该悬浊液在两个 6 cm2 的防氧化铟锡铝层载玻片上(15–25𝛺,Sigma-Aldrich),后来呢水的压强在具有100 mM 常见葡萄品种糖和0.3 mM 叠氮化钠的49:51 D2O:H2O悬浊液中。考虑到诱惑囊泡成型,将电*放置在10 Hz 下1.1 V (rms) 电流电压下保持2小时英文。将产生刷出的囊泡保管在高温牛血清廉淀粉酶包被的小瓶中。考虑到克制较小囊泡的人数,公司在采用前会采用Whatmann 5.0 μm孔的直径硝酸钠纤维材料素脱水器脱水GUV 悬浊液( 15 )。对待膜管化實驗,采用中枢神经节苷脂GM1和染色的的剂霍乱黑色素488地方政府膜小叶确定染色的的,内容如下图示:将以上的氯仿中的脂质混合式型物变更到甲醇中,“添加图片0.2 wt.% GM1。后来呢按以上的技术确定电变大系数。供试品制取开始之前,将 50 mg/L 霍乱黑色素 488 “添加图片到磷酸二氢钠储存盐悬浊液 (PBS) 中,仅对囊泡的表面确定染色的的。