DOPE-PEG-Biotin在巨型单层囊泡膜构建中的应用研究
期刊论文:脂质膜上的粒子制做有效途径下载链接://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5作家:卡斯帕· 范德韦尔1∙多丽丝 ·海因里希1,2∙丹妮拉·J· 克垃夫特1节选:化学上的品苯乙稀 (99%)、衣康酸 (99%)、4,4'-偶氮双 (4-氰基戊酸) (98%)、D-红提糖 (99%)、牛血清正球核蛋白 (98%)、甲醇 (99.9%)、氯仿 (99%)、磷酸钠 (99%)、阳极氧化氘 (70%)、N-羟基磺化蜜腊酰亚胺钠盐 (98%) 和 1,3,5,7-四甲基-8-苯基-4,4-二氟硼氮杂引达省苯 (97%, BODIPY) 购自 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO;甲氧基聚(乙二醇)胺 (mPEG, M W = 5000) 购自 Alfa Aesar;氯化钠 (99%) 和叠氮化钠 (99%) 购自 Acros Organics; 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺酸洗盐 (99%),存在 Carl Roth;NeutrAvidin (*菌物素球核蛋白) 和霍乱毒性 B 亚基 Alexa Fluor 488 相结合物 (霍乱毒性 488),存在 Thermo Scientific;DNA 寡核苷酸 (菌物素-5′-TTTAATATTA-3′-Cy3),存在 Integrated DNA Technologies;或者存在Avanti Polar Lipids装修公司的Δ9-顺式1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸甲醇胺-N-(菌物素基(聚乙二醇)-2000) (DOPE-PEG-菌物素)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸甲醇胺-N-(丽丝胺罗丹明B磺酰基) (DOPE-罗丹明)和G M1感觉神经节苷脂(GM1)。那些化学上品均按原样操作。那些科学实验均操作按照Millipore过滤装置整体(Milli-Q Gradient A10)拿到的电阻功率率有18.2 M Ω cm的去正离子水。膜配制所采用标准规范电热胀的技术制得厚度为 5 至 20 μm的超大型编织成单层囊泡 (GUV) ( 14 )。在氯仿中制得 2 g/L 的脂质相溶型物,其由 97.5 wt.% DOPC、2.0 wt.% DOPE-PEG-生物技术素和 0.5 wt.% DOPE-罗丹明结构。接下去来,取 10 μL该水溶剂在四块 6 cm2 的防氧化铟锡铝层载玻片上(15–25𝛺,Sigma-Aldrich),之后浸入在含带100 mM 巨峰葡萄糖粉和0.3 mM 叠氮化钠的49:51 D2O:H2O水溶剂中。为着诱惑囊泡导致,将电*放至10 Hz 下1.1 V (rms) 电压降下快速2小时英文。将就此赚取的囊泡存贮在在常温牛血贞洁蛋清包被的小瓶中。为着减缓较小囊泡的用户,公司在便用的前随便便用的Whatmann 5.0 μm直径氯化铵玻纤素做好过滤器板做好过滤器GUV 水溶剂( 15 )。我们对膜管化科学实验,便用的运动神经节苷脂GM1和印染剂霍乱内毒性488对内膜小叶做好印染,如下图甲中图甲中:将出现氯仿中的脂质相溶型物更改到甲醇中,移除0.2 wt.% GM1。之后按出现工艺做好电热胀。样本制得之后,将 50 mg/L 霍乱内毒性 488 移除到聚磷酸盐缓冲区盐水溶剂 (PBS) 中,仅对囊泡的表面层做好印染。