DSPE-PEG-Cy7标记胶束的合成与纯化流程
文献资料:长宽、自由电荷和肽配体长短对小充分纳米级粒子束肾脏靶点性的印象联结://aiche.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/btm2.10173编辑:黄毅, 蒋凯瑞, 张旭亭, 殷志忠节选:胶束制作而成按照规范标准Fmoc介导的固相肽自动人工图片法,在全自功PS3肽自动人工图片仪(USA亚利桑那州图森市Protein Technologies总部)上,用rink Amide树脂材料胶(USA亚利桑那州图森市Protein Technologies总部)自动人工图片肽。所有的肽字段的N末段均增长半胱氨酸,以做好硫醚键合表现。然而用体型之比94:2.5:2.5:1的三氟乙酸:1,2-乙二硫醇:水:三异丙基硅烷将肽从树脂材料胶上切去来。切去来的肽用寒冷的乙醚发展并洗洁三次,溶水Milli-Q纯水里面的,冻干后存放于-20°C。粗肽按照反相高效率液质色谱法(HPLC)(Shimadzu,京都,岛国)在 C18 柱(Phenomenex,Torrance,CA)上在 55°C 使用 0.1% 甲酸的乙腈/水结合物做好纯化。使用的产品辅助的激光手术解吸电离飞行器时段质谱具体分析 (MALDI-TOF) (Autoflex speed, Bruker, Billerica, MA) 对纯化的肽来进行分析方法,并完成硫醚键与 1,2 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸工业乙醇胺 N-[马来酰亚胺 (聚乙二醇)-1000/2000/5000] 或 DSPE-PEG (1000)-马来酰亚胺/DSPE-PEG (2000)-马来酰亚胺/DSPE-PEG (5000)-马来酰亚胺 (Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL) 依照,将等摩尔量的脂质和纯肽在 Milli-Q 水 (pH 7.2) 中混合型,在常温下轻柔混合突破 24 1天。分层物经C4柱(Phenomenex工司,加州托伦斯)进一部纯化,接成如上说明的MALDI-TOF确定研究方法。荧光团偶联一人的提炼一下:将等摩尔量的Cyanine7 NHS酯(Lumiprobe工司,马里宝鸡亨特谷)与1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸酒精胺N-[氨基(聚乙二醇)-1000/2000/5000](铵盐)或DSPE-PEG(1000)-胺/DSPE-PEG(2000)-胺/DSPE-PEG(5000)-胺(Avanti Polar Lipids工司,阿拉巴马州阿拉巴斯特)在0.1 M碳酸氢钠硫酸铜溶液(pH 8.3)中分层,高温一晚。分层物经C4柱纯化,接成如上说明的MALDI-TOF确定研究方法。采用自安装分解了13类型型的胶束。分解了由有差异摩尔比的两亲分子结构组成了的胶束:100% DSPE-PEG-肽、50:50摩尔比的DSPE-PEG-甲氧基:DSPE-PEG-肽、90:10摩尔比的DSPE-PEG-肽:DSPE-PEG-Cy7包括45:45:10摩尔比的DSPE-PEG-甲氧基:DSPE-PEG-肽:DSPE-PEG-Cy7。将其他缩聚反应溶水于甲醇或氯仿中,接成离氮气风干导致塑料膜。塑料膜在真空泵下干過夜,并在80°C防水化301分钟。采用 DLS、zeta 电位差侧量和 TEM 的胶束在 Milli-Q 水清水化,而采用身体内部给药的胶束在磷酸缓冲区悬浊液 (PBS) 清水化。