蛋白质的荧光标记技术
蛋白质的荧光标记技术
蛋白荧光标记是将荧光分子共价连接到蛋白质上,用于成像追踪、结构分析、相互作用研究、流式分析、ELISA与生物传感等。常见目标蛋白包括抗体、酶、膜蛋白、激素与重组蛋白等。
标记策略:
赖氨酸侧链标记(常见):
- 选用NHS-FITC、NHS-Alexa Fluor等;
- 标出简约,但不具位点考虑性;
半胱氨酸特异标记:
- 利用Maleimide荧光探头(如Alexa Fluor 488-Maleimide);
- 提高位点确定性遮盖;
定点标签标记(如His-tag、Avi-tag):
- 需用带亲和标记的荧光电极/链霉亲和素耦联染色剂;
标记度控制与检测:
- 自我调节现象摩尔比;
- 选择分光光度法(280/λmax)法测体现率;
- SDS-PAGE、质谱安全验证完整详细性;
推荐荧光试剂与产品:
FITC、TRITC、Rhodamine B(经典绿色/红色标记)
Alexa Fluor系列(488、555、647):高亮度与稳定性
Cy3、Cy5、Cy7 NHS/Maleimide:适合蛋白成像与流式
Dylight系列染料:广谱应用
荧光标记链霉亲和素/蛋白A/G:用于间接标记系统
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