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外泌体是40-180 nm大小的细胞外囊泡,由各种类型的细胞广泛分泌,包括细胞,免疫细胞,干细胞和内皮细胞等。它们在长距离和短距离的细胞间通信中起着至关重要的作用。有研究在来源的外泌体膜中发现了各种特定的表面粘附分子,它们介导了对同源细胞的靶向,同时外泌体膜上高表达的CD47蛋白可以帮助外泌体逃脱巨噬细胞的吞噬作用。据我们所知,此前还没有外泌体膜包被仿生纳米颗粒靶向清除CTCs并转移的报道。外泌体膜修饰的策略可以帮助纳米粒子规避巨噬细胞的吞噬作用,并靶向原发,识别CTCs。
外泌体膜包载仿生前药纳米系统的制备与表征
进行单硫醚键将亚油酸与PTX偶联来制作ROS比较敏感的PTX前药(图1)。采用精华液萃取剂挥发法将PTX-S-LA和CuB共装载的容量到PEG-PCL微米技术塑料再生颗粒状中,以制作PCNP,这之中P说道PTX-S-LA,C说道CuB。但是将PCNP与EM孵育以收集EMPC。雷同的处置方案制作分开装载的容量有PTX-S-LA或CuB的EMP或EMC。如图2表明了PCNP的气流趋势学尺寸和线条,同旁内角含有条件的圆柱状线条,峰值大大小小比较敏感80 nm。PTX-S-LA和CuB在PEG-PCL微米技术颗粒状中的载药量分开为9 wt%和5 wt%,包封率分开为87.6%和69.2%。用到系数离心力法抽取外泌体。可以使用散射电子元器件显微镜(TEM)三维成像探求外泌体的碟状空间结构,与对应显著特点性外泌体标识物TSG101,CD9和CD81的球蛋白质含量痕印分折,意味着外泌体已经变成就溶合。EMPC是可以使用对抽取的外泌体做好低渗解决来制取的。将PEG-PCL奈米技术顆粒与EM深入骤孵育以制取EMPC。可以使用大大减少的zeta电势差,加大的粒度分布(〜100 nm)和TEM数字图像声明书PEG-PCL奈米技术顆粒表面层上EM的成就包被。

是为了常规查验仿生学设计外泌体納米粉末壳上膜蛋清的产生,按从前的报到来进行了十三烷基盐酸钠聚炳烯酰胺疑胶电泳(SDS-PAGE)和蛋清质印痕实验设计。膜蛋清标出的SDS-PAGE蛋清常规查验表达,在仿生学设计外泌体納米粉末的蛋清质谱中,恢复了从EM续承的特别蛋清。CD44和CD47针对转换至关得尤为重要。CD44是MDA-MB-231受损受损人体细胞膜上的外观吸咐团伙,在CTC与转换灶的吸咐中起关健效用。CD47能否保护的受损受损人体细胞膜不被受到巨噬受损受损人体细胞膜的变异效用,变异效用与的侵蚀性相关联。如2D提示,什么和什么偏铝酸根于**受损受损人体细胞膜膜和EM上,并在EMPC中维持较好,以介导同型**受损受损人体细胞膜靶向疗法。第二,用DiI(灰色)箭头EM,再用香豆素6(C-6,绿色健康)箭头疏水中心,以全面检查EM齐全合并PEG-PCLnm技术技术颗料。将双箭头的nm技术技术颗料插入到MDA-MB-231人体细胞膜中2 h,再用共聚交激光器打印体视显微镜(CLSM)分析。长为2E如图,DiI的荧光与C-6的荧光共定位手机,表述外泌体防生nm技术技术颗料在人体细胞膜摄食某段周期后可补齐结构的运输安全性。

接下去来,我门探讨了C-6标志的PEG-PCL微米科粒(C-6 NPs),C-6标志的红受损组织人体癌血癌生殖内部质结构包被的PEG-PCL微米科粒(RM @ C-6 NPs)和C-6标志的在MDA-MB-231,MCF-7和NIH 3T3受损组织人体癌血癌生殖内部质中包被外泌体的微米科粒(EM @ C-6 NPs),以确定外泌体仿生设计学微米科粒的同型**受损组织人体癌血癌生殖内部质靶向药物治疗技能。进行了红受损组织人体癌血癌生殖内部质结构对PEG-PCL微米激光束的淡化,以核验EM上的球脂肪酸在促使MDA-MB-231受损组织人体癌血癌生殖内部质发挥化上的最为关键的意义。下图3A随时,C-6 NPs和RM @ C-6 NPs的C-6荧光比EM @ C-6 NPs的荧光低,这是因为受损组织人体癌血癌生殖内部质摄取量的加快归因于外泌体上的球脂肪酸。此外,将MCF-7和NIH 3T3受损组织人体癌血癌生殖内部质设为呈阴性照表,这进第一步表示,用EM淡化微米科粒可特备减弱相同来原**受损组织人体癌血癌生殖内部质的发挥化。第三用免疫印迹受损组织人体癌血癌生殖内部质仪检验靶向药物治疗意义的定量分析。下图3B随时,在MDA-MB-231受损组织人体癌血癌生殖内部质中,EM @ C-6 NP的荧光预警比C-6 NP和RM @ C-6 NP的荧光预警高3.5倍。相较于此,与C-6 NP和RM @ C-6 NP相较,EM @ C-6 NP在MCF-7和3T3受损组织人体癌血癌生殖内部质中未屏幕上显示荧光减弱。以下说的整个的结果是因为,仿生设计学外泌体微米科粒对同型**受损组织人体癌血癌生殖内部质都具有首选性感染力。
然后,验证了外泌体上的CD47对巨噬细胞吞噬能力的作用。将接种于12孔板的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞与C-6 NP,RM @ C-6 NP和EM @ C-6 NP孵育。如图4C所示,RM @ C-6 NP和EM @ C-6 NPs表现出比C-6 NPs低得多的内在化。对于流式细胞仪定量分析,与RM @ C-6 NP和EM @ C-6 NP相比,C-6 NP的荧光强度增加了3.1倍。结果证实,RM和EM上的CD47均可巨噬细胞的吞噬作用。
分析方法:将ROS过敏的单硫醚键拼接的紫杉醇-亚油酸前药(PTX-S-LA)和钢丝绳电动手捻钢丝绳电动葫芦素B一同芯片封装到PEG-PCL配位合成树脂中制成双载药胶束,相结第一步用細胞衍化的外泌体膜装饰,配制外泌体样序贯活力性仿生技术前药納米服务平台。该药物除了地靶点原发,而是活力性聊天截获去除CTCs,导致**了移动。細胞摄入后,納米粒将**减少出钢丝绳电动手捻钢丝绳电动葫芦素B,导致确认FAK / MMP网络信号信号通路上下调整**阻隔**細胞的黏附性,移动和侵蚀并移动。时候,减少的钢丝绳电动手捻钢丝绳电动葫芦素B增进了細胞中的ROS平行,级联驱动了PTX-S-LA前药的活力性,起到了一石二鸟的目的。该药物突出表现形式出了出众的的CTCs靶点实力、增进的前药活力性、延后的肚子里间歇准确时间、更大的蓄积和越来越的瘤内构建,在原位和异位MDA-MB-231建模 中其突出表现形式出得众的的原发性和抗移动活力性。