方式:TMB (3',3',5',5',-四甲苯联苯胺）是辣根过非金属氧化物物酶（HRP)的显色底物，HRP能崔化TMB显色底物生成白色的阳正离子乙酰乙酸，主要在―37Onm和 652nm有降解峰，当加盟酸结束响应后，白色转成成黄色，就可以在450nm光波波长下检测法 OD值。

一、作图条件身材曲线

称取1mg HRP粉状粉化，加进 1mL ddH O，就是指 1mg/mL，再依次兑水成0.0001 、 0.0002、0.0004、0.0008 、 0、0016、0.0032、0.0064、0.0128、0.0256ug/mL,依次取_10uL，进入100uLTMB显色底物，15min后假如50uL 2M H,SOs终结发应，即时测量OD450值，以HRP品质为横坐标轴轴，OD450值一般选择纵大地坐标，作图HRP酶活跃度标淮身材曲线。

二、铺板、转染

三、测定法神经细胞吞入的HRP含磷量

1、转染后6h后，将6孔板中的培训基吸出，取500uL DPBS沿皿壁建立到每台孔中，洗滌

体细胞以此，立马赋予 2mL无FBS的 DMEM 的培养液使神经细胞饥饿16h 。

2、之前用无 FBS 的 DMEM 性能1mg/mLHRP，并背光治疗，16h后培养教育出来皿中的培养教育出来基吸出，

每孔内加入80OuL的HRP硫酸铜溶液置37℃，5%CO2激发箱中10min 。

3、10min后立即将迎来上清注入到 15mL离心式管内收回，DPBS洗衣体细胞一天，以来每孔里添加入

200uL 胰酶，消化系统受损细胞。加进 1mL DPBS重悬组织细胞并更改到1.5mLEP分液漏斗，3000rpm ,4℃离心力2min,再次该步一些，上清扔掉，3000rpm，4℃离心式1min，将上清吸走净。4、标准配置裂解液，用强RIPA裂解液（ 50mM Tris-cl pH7.4，150mM Nacl，1%TritonX-100 )

里加入100×PMSF和50×PIC两类蛋清酶**剂。完后依次取50uL将细胞系沉垫重悬，并拖到混悬仪上 4℃裂解神经元1.5h。

5、待生殖细胞做好裂解后14000rpm，4℃离心力10min，将上清转回到新的 1.5mLEP分液漏斗。

6、取5uL受损细胞裂解液填加到 45uLddH :O中，扑灭10，涡流混匀后取 10uL加到96孔板中，

做3个相平行样，用排枪放入100uL TMB 显色底物(TMB bufferA与 TMB bufferB等比热容混后)，制冷避光显色15min，申请加入50uL 2M H zSO4结束作用，请马上用酶标仪法测定OD450值。

7、按照规范标准的身材曲线来计算細胞吞入的HRP份量。

TMB bufferA : 500mL

NaAc·3H zO 13.6 g

Citric Acid1.6 g

30% HzO:0.3 ml

Add ddH O to 500 ml

TMB bufferA : 500mL

TMB (first dissolved in 3 ml DMSO) 0.15 g

EDTA-2Na 0.2g

Critic Acid 0.95

gGlycerol 50 ml

Add ddH 20 to 500 ml

成都杏彩体育平台  微生物高新科技是可以给出所有酶化学反应厂品是指有β-半乳糖腐蚀酶，回弹力蛋白质酶酶，脱氧核糖核酸酶I，胶原酶，梭菌蛋白质酶酶，胆固酯酶等

兔抗马IgG-HRP

兔抗鸡IgG一HRP

兔抗牛IgG一HRP

羊抗鸡IgG一HRP

羊抗马IgG-HRP

羊抗猪IgG一HRP

羊抗大鼠IgG一HRP

羊抗小鼠IgG-HRP

羊抗兔IgG一HRP

羊抗人IgG一HRP

兔抗狗IgG-HRP

兔抗豚鼠IgG-HRP

兔抗猴IgG-HRP

HRP标记图片前端腺特情人抗原(HRP-PSA)多肽

HRP图标水绿色通道淀粉酶12(HRP-AQP12)多肽

HRP标签水通畅蛋白质6(HRP-AQP6)多肽

HRP标记符号咧美辛

HRP箭头微囊藻毒物RR(MC-RR-HRP)

HRP标出微囊藻毒物LR(MC-LR-HRP)

HRP标记符号雌三醇(E3-HRP)

HRP记号氰戊菊酯

HRP记号新霉素

HRP符号前例腺素E2(PGE2-HRP)

HRP记号四个坚持腺素E1(PGE1-HRP)

HRP标志前某腺素A2(PGA2-OVA)

HRP箭头氯磺隆(CSH-HRP)

HRP标示热量(Cholesterol-HRP)

HRP图标地塞米松(Dexamethasone-HRP)

HRP箭头氢化可的松(Hydrocortisone-HRP)

HRP箭头雌二醇(Estradio1-HRP)

HRP标出睾啊(Testosterone-HRP)

HRP标上孕酮(Testosterone-HRP)

HRP图标维生素EE(VE-HRP)

HRP标签复合维生素B6(VB6-HRP)

HRP标记图片胡萝卜素A(VA-HRP)

HRP标志胆结节醇(VD3-HRP)

HRP图标维生素ED2(VD2-HRP)

HRP标记符号复合维生素B3(VB3-HRP)

HRP标志黄素单线程首酸(FMN一HRP)

HRP标出维生素EB2(VB2-HRP)

HRP标识苯并菲(Chrysene-HRP)

HRP符号苏(Fluorene-HRP)

HRP标出石杉碱甲(Huperzine-HRP)